他克莫司固體分散體膠囊劑的研究.pdf

1、他克莫司(Tacrolimus,FK-506)是1979年從日本筑波地區(qū)土壤中一種鏈霉菌株發(fā)酵產(chǎn)物中分離出來的23環(huán)大環(huán)內酯類抗生素(紅霉素族)。分子式為C44H69NO12,分子量為803.48。水溶性很差,易溶于甲醇、乙醇、氯仿等有機溶劑；不易通過胃腸道吸收,動物試驗顯示吸收很差。FK-506是強效免疫抑制劑,主要用于器官和組織移植前后治療機體的排斥反應,具有與環(huán)孢霉素A(CsA)相似而更廣泛的免疫抑制作用,效力比CsA高10～10

2、0倍,而毒副作用更少。
　　 目前,國內尚無自行研制的FK-506固體分散體膠囊劑,而進口制劑口服膠囊(1mg,粒)的售價高達32元/粒,系統(tǒng)研究并開發(fā)國產(chǎn)的FK-506口服固體劑型很有意義。因此本課題從國內醫(yī)藥工業(yè)的實際情況出發(fā),試采用較簡單的工藝和處方制備FK-506固體分散體硬膠囊劑。主要包括以下四部分內容:
　　 一、他克莫司含量和體外溶出度測定分析方法的建立
　　 建立HPLC-UV法測定FK-506固

3、體分散體膠囊劑的含量。采用HypersilODS-2 C18柱,流動相乙腈-0.1％磷酸(65:35),流速1.0 mL/min,柱溫60℃,檢測波長UV220nm。FK-506在10～120μg/mL范圍內呈良好的線性關系,回收率在100.01％～102.75％之間,RSD均<2％。在本色譜條件下,FK-506與有關物質分離度良好,方法靈敏度高,準確,重現(xiàn)性好。經(jīng)過方法學評價,符合要求。
　　 建立HPLC-UV法測定FK-5

4、06固體分散體膠囊劑體外溶出液中FK-506的含量。采用Luna ODS-2 C18柱,流動相乙腈-0.1％磷酸(70:30),流速1.0 mL/min,柱溫60℃,檢測波長UV230nm。FK-506在0.5～5.0μg/mL范圍內呈良好的線性關系,回收率在98.33％～100.93％之間,RSD均<2％。方法靈敏度高,準確,重現(xiàn)性好。經(jīng)過方法學評價,符合要求,該方法可用于FK-506固體分散體膠囊劑的處方篩選和質量評價。
　　

5、 二、他克莫司固體分散體的制備及其體外特性研究
　　 采用表面活性劑泊洛沙姆188(F68)和硬脂酸聚烴氧(40)酯(S40),非表面活性劑聚維酮PVP k29/32和羥丙甲纖維素(HPMC E3)為水溶性載體材料,以溶劑-熔融法和溶劑法制備FK-506固體分散體。以溶解度和體外溶出度為重要指標,篩選合適的載體和藥物/載體的配比。采用HPMC為載體材料制成的固體分散體,溶解度由原料藥的2.79μg/mL增加至56.48μg/m

6、L,在水中的溶出最快,5min即達73.11％。故最終選擇HPMC為載體,FK-506/HPMC之比為1:5。差示掃描量熱法(DSC)和X-射線衍射法(XRD)鑒別結果表明FK-506在固體分散體中以無定型或分子狀態(tài)高度分散,以紅外光譜測定法(FTIR)探測結果表明藥物與載體間發(fā)生了相互作用。
　　 采用二氯甲烷-乙醇的混合溶劑系統(tǒng)制備固體分散體。制備方法:首先將5gHPMC均勻分散在25mL乙醇中,逐漸添加已溶有1g FK-5

7、06的二氯甲烷25mL,輕輕攪拌至完全溶解。50℃旋轉蒸發(fā)除去溶劑,-18℃冷凍6h,真空干燥24h,過80目篩即得。
　　 三、他克莫司固體分散體膠囊劑的制備和質量標準研究
　　 以體外溶出度為指標,選擇微晶纖維素Avicel PH-301作為填充劑。以休止角為指標,選擇加入2％微粉硅膠作為助流劑,粉體流動性的效果較好,休止角為35.75°。采用差示掃描量熱法(DSC)探測藥物與輔料之間的相互作用,表明微晶纖維素PH-

8、301、微粉硅膠用于此處方不會對藥物造成干擾。
　　 確定FK-506膠囊劑的處方及制備工藝,重復制備3批膠囊劑,對其進行含量和有關物質、45min體外溶出度考察,均符合規(guī)定。采用f2相似因子法對3批膠囊劑的體外溶出度進行統(tǒng)計分析,f2值為70.5～100,無顯著性差異。比較FK-506膠囊劑在4種溶出條件(水/50rpm、水/100rpm,PBS/100rpm,pH1.0/100rpm)下的體外溶出度差異,f2值均>50,無顯

9、著性差異,表明不同轉速、pH值對FK-506體外溶出度的影響不大。
　　 FK-506固體分散體膠囊劑的體外溶出機制初步探討結果表明,Korsmeyer-Peppas模型的擬合效果最好,其溶出速率常數(shù)在不同轉速、溶出介質下均<0.45,為典型的Fick擴散。
　　 對FK-506固體分散體膠囊劑的質量標準進行研究:包括化學鑒別、TLC鑒別、HPLC鑒別,含量、有關物質和體外溶出度測定、乙醇和二氯甲烷殘留量測定等。

10、　　 四、他克莫司固體分散體膠囊劑的穩(wěn)定性研究
　　 穩(wěn)定性研究項目包括外觀,含量、有關物質和45min體外溶出百分數(shù)。
　　 對FK-506膠囊劑影響因素試驗結果表明,高溫、高濕及光照對本品穩(wěn)定性有一定影響。將3批FK-506膠囊劑采用雙層鋁塑復合膜包裝,置30℃、RH60％條件下加速試驗考核6個月,置25℃、RH60％條件下進行長期穩(wěn)定性試驗,結果均表明本處方制成的膠囊劑,各項檢驗指標均符合本品質量標準的有關規(guī)定,