Geranylgeranyltransferase I對(duì)神經(jīng)元突觸發(fā)育的作用研究.pdf

1、目的：研究GeranylgeranyltransferaseI(GGT)與神經(jīng)元突觸發(fā)育的關(guān)系；觀察過(guò)表達(dá)或下調(diào)GGTβ表達(dá)對(duì)大鼠腦海馬神經(jīng)元突觸發(fā)育的影響，從而為神經(jīng)元突觸發(fā)育機(jī)制提供新的理論依據(jù)。
　　 方法：1．提取不同發(fā)育時(shí)期（P0，P7，P14，P21，P28，成年）的大鼠海馬組織，用蛋白免疫印跡(WB)檢測(cè)GGT特異性β亞基的蛋白表達(dá)；2．取P14的大鼠海馬組織，進(jìn)行總蛋白、突觸小體(Synaptosome)及突觸后

2、致密體(PSD)抽提，WB檢測(cè)GGTβ亞基是否定位于突觸部位；3．在培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元中共表達(dá)YFP和GGTβ亞基，免疫熒光化學(xué)法檢測(cè)神經(jīng)元單位長(zhǎng)度樹(shù)突上突觸前標(biāo)志物Synapsin1和突觸后標(biāo)志物PSD-95聚集體的數(shù)量；4．在培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元中轉(zhuǎn)染GFP標(biāo)記的GGTβ siRNA，或轉(zhuǎn)染YFP后，用GGT特異性抑制劑GGTI-2147處理神經(jīng)元，檢測(cè)神經(jīng)元單位長(zhǎng)度樹(shù)突上突觸前標(biāo)志物Synapsin1和突觸后標(biāo)志物PSD-95聚集體的數(shù)

3、量。
　　 結(jié)果：1．GGTβ亞基的蛋白表達(dá)水平在突觸發(fā)育的時(shí)間窗內(nèi)逐漸增加，在突觸發(fā)育最快的時(shí)間達(dá)到高峰；GGTβ亞基位于神經(jīng)元突觸部位；2．過(guò)表達(dá)GGTβ亞基促進(jìn)對(duì)突觸前、后蛋白PSD-95、Synapsin1的聚集，下調(diào)GGTβ亞基或應(yīng)用GGT特異性抑制劑GGTI-2147抑制其活性后，則產(chǎn)生相反作用。
　　 結(jié)論：1．GGT與神經(jīng)元突觸發(fā)育密切相關(guān)；2．過(guò)表達(dá)GGT促進(jìn)神經(jīng)元突觸發(fā)育，下調(diào)GGT表達(dá)或抑制其活性抑