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1、目的:研究GeranylgeranyltransferaseI(GGT)與神經(jīng)元突觸發(fā)育的關(guān)系;觀察過(guò)表達(dá)或下調(diào)GGTβ表達(dá)對(duì)大鼠腦海馬神經(jīng)元突觸發(fā)育的影響,從而為神經(jīng)元突觸發(fā)育機(jī)制提供新的理論依據(jù)。
方法:1.提取不同發(fā)育時(shí)期(P0,P7,P14,P21,P28,成年)的大鼠海馬組織,用蛋白免疫印跡(WB)檢測(cè)GGT特異性β亞基的蛋白表達(dá);2.取P14的大鼠海馬組織,進(jìn)行總蛋白、突觸小體(Synaptosome)及突觸后
2、致密體(PSD)抽提,WB檢測(cè)GGTβ亞基是否定位于突觸部位;3.在培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元中共表達(dá)YFP和GGTβ亞基,免疫熒光化學(xué)法檢測(cè)神經(jīng)元單位長(zhǎng)度樹(shù)突上突觸前標(biāo)志物Synapsin1和突觸后標(biāo)志物PSD-95聚集體的數(shù)量;4.在培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元中轉(zhuǎn)染GFP標(biāo)記的GGTβ siRNA,或轉(zhuǎn)染YFP后,用GGT特異性抑制劑GGTI-2147處理神經(jīng)元,檢測(cè)神經(jīng)元單位長(zhǎng)度樹(shù)突上突觸前標(biāo)志物Synapsin1和突觸后標(biāo)志物PSD-95聚集體的數(shù)
3、量。
結(jié)果:1.GGTβ亞基的蛋白表達(dá)水平在突觸發(fā)育的時(shí)間窗內(nèi)逐漸增加,在突觸發(fā)育最快的時(shí)間達(dá)到高峰;GGTβ亞基位于神經(jīng)元突觸部位;2.過(guò)表達(dá)GGTβ亞基促進(jìn)對(duì)突觸前、后蛋白PSD-95、Synapsin1的聚集,下調(diào)GGTβ亞基或應(yīng)用GGT特異性抑制劑GGTI-2147抑制其活性后,則產(chǎn)生相反作用。
結(jié)論:1.GGT與神經(jīng)元突觸發(fā)育密切相關(guān);2.過(guò)表達(dá)GGT促進(jìn)神經(jīng)元突觸發(fā)育,下調(diào)GGT表達(dá)或抑制其活性抑
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