大鼠脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元與盆節(jié)神經(jīng)元之間在體外突觸形成的研究.pdf

1、本研究分為二部分：
　　 第一部分：大鼠脊髓前角與盆神經(jīng)節(jié)之間植塊聯(lián)合培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的：研究大鼠脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元與盆神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元之間的相互作用。
　　 方法：利用神經(jīng)組織的植塊培養(yǎng)法建立新生大鼠脊髓前角與成年大鼠盆神經(jīng)節(jié)之間植塊的聯(lián)合培養(yǎng)體系，倒置相差顯微鏡下觀察兩種神經(jīng)元之間形態(tài)學(xué)的變化。
　　 結(jié)果：聯(lián)合培養(yǎng)體系中神經(jīng)組織的植塊在體外培養(yǎng)時(shí)均生長(zhǎng)良好，脊髓前角植塊生長(zhǎng)出的部分神經(jīng)突起與盆節(jié)

2、神經(jīng)元的神經(jīng)突起交織分布在一起，形成明顯形態(tài)上的接觸。
　　 結(jié)論：大鼠脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元與盆節(jié)神經(jīng)元之間形成明顯形態(tài)上的接觸，提示在體外聯(lián)合培養(yǎng)時(shí)脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的軸突與盆節(jié)神經(jīng)元之間可能形成了功能性的相互作用。
　　 第二部分：大鼠脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元與盆節(jié)神經(jīng)元之間在體外的聯(lián)合培養(yǎng)
　　 一、新生大鼠脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的分離與培養(yǎng)
　　 目的：研究新生大鼠脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的體外分離、培養(yǎng)和純化方法。
　　

3、 方法：從新生1 d 大鼠的脊髓前角組織中分離脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元，采用密度梯度離心，差速貼壁及無(wú)血清限制性培養(yǎng)基等措施獲得相對(duì)純化的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元。應(yīng)用脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元特異的膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶多克隆抗體(ChAT)對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。
　　 結(jié)果：原代培養(yǎng)細(xì)胞體外培養(yǎng)72 h后，神經(jīng)元生長(zhǎng)出許多神經(jīng)突起，具有運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的特征形態(tài)。神經(jīng)細(xì)胞能存活2 w 以上。脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元表達(dá)膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶，呈ChAT 陽(yáng)性反應(yīng)。
　　 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)提

4、供了一種成功進(jìn)行新生大鼠脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元原代培養(yǎng)的方法，為運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的進(jìn)一步研究提供了幫助。
　　 二、成年大鼠盆節(jié)神經(jīng)元的原代培養(yǎng)
　　 目的：研究成年大鼠盆節(jié)神經(jīng)元的體外分離、培養(yǎng)方法，為建立脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元與盆節(jié)神經(jīng)元的聯(lián)合培養(yǎng)體系奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：從成年雄性大鼠盆神經(jīng)節(jié)中分離盆節(jié)神經(jīng)元，經(jīng)過(guò)充分摸索采用膠原蛋白酶、胰蛋白酶兩步酶消化、分次吹打及無(wú)血清限制性培養(yǎng)基輔以神經(jīng)生長(zhǎng)因子等方法進(jìn)行盆節(jié)神經(jīng)元的原代