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文檔簡介
1、目的:研究表皮生長因子(Epidermalgrowthfactor,EGF)與睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(Ciliaryneurotrophicfactor,CNTF)基因共轉(zhuǎn)染對脊髓損傷大鼠運動功能恢復以及促進反應性星形膠質(zhì)細胞逆分化的作用,并探討其機制。
方法:4月齡SPF級SD大鼠共96只,體重約230g,雌雄不限,將其隨機平均分為EGF轉(zhuǎn)染組(A組),CNTF轉(zhuǎn)染組(B組),CNTF與EGF共轉(zhuǎn)染組(C組)和對照組(D組)4組,
2、每組24只。采用改良Allen’s法制備大鼠脊髓損傷模型,后應用Alzet微滲透壓泵分別向A、B、C組和D組持續(xù)轉(zhuǎn)染重組EGF與CNTF質(zhì)粒和空白質(zhì)粒各5μg(A組單獨EGF轉(zhuǎn)染,B組單獨CNTF轉(zhuǎn)染,C組EGF與CNTF共轉(zhuǎn)染,D組為空白質(zhì)粒)。在術后1、2、4、6周采用BBB運動功能評分系統(tǒng),斜板運動試驗檢測大鼠運動功能恢復情況;采用RT-PCR和Westernblot方法檢測EGF與CNTF基因的表達;采用免疫熒光雙標染色和組織學
3、觀察EGF與CNTF對反應性星形膠質(zhì)細胞增殖分化的影響以及脊髓組織病理變化情況。
結果:術后2、4、6周運動功能評分C組BBB評分明顯高于其余三組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。RT-PCR和Westernblot方法檢測顯示A組大鼠脊髓組織可見EGF,B組可見CNTFmRNA與蛋白的表達,C組可見共同表達,而D組則未見明顯表達。組織學觀察示C組脊髓結構以及神經(jīng)元形態(tài)恢復較好且逐漸趨于正常,且免疫熒光雙標染色示C組脊髓組織
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