黃芪多糖促進(jìn)脊髓損傷大鼠運(yùn)動功能恢復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)主要觀察黃芪多糖(Astragalus Polysaccharide；APS）對脊髓損傷（Spinal Cord Injury；SCI）大鼠運(yùn)動功能恢復(fù)及組織病理變化的影響，并進(jìn)一步檢測黃芪多糖對脊髓損傷大鼠 GAP-43（Growth-associated protein-43）及MAP2（Microtubule-associated protein2）蛋白表達(dá)的影響，闡明其治療脊髓損傷的作用機(jī)制及靶點(diǎn)，從而明確黃芪多糖對

2、脊髓損傷的治療作用。
　　方法：
　　1.黃芪多糖對大鼠脊髓損傷后運(yùn)動功能障礙和脊髓病理損害的修復(fù)作用
　　70只成年Sprague-Dawley大鼠，體重200-220g，隨機(jī)分為正常組（n=10）、損傷組（n=30）和黃芪多糖治療組（n=30），損傷組和黃芪多糖治療組內(nèi)部再分為7d、14d、28d三個亞組。損傷組和治療組均采用Allen打擊法(10g×25mm)制備大鼠T10脊髓損傷模型。造模成功后，治療組于術(shù)后腹

3、腔注射黃芪多糖注射液（Sigma公司）10mg/Kg，每天一次，持續(xù)至取材為止。術(shù)后7d、14d、28d，各亞組分別行BBB評分，HE染色觀察組織大體結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)，Nissl染色觀察尼氏小體的變化情況，鉻花氰染色觀察髓鞘改變情況。
　　2.黃芪多糖對大鼠脊髓損傷后GAP-43及MAP2表達(dá)的作用研究
　　采用免疫熒光和western blot檢測脊髓損傷大鼠GAP-43和MAP2蛋白表達(dá)情況，檢測APS治療脊髓損傷的作用機(jī)

4、制及治療靶點(diǎn)，明確黃芪多糖對脊髓損傷治療作用的分子機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　1.術(shù)后各時間點(diǎn)，治療組BBB評分均高于損傷組，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。損傷組大鼠在7d、14d損傷脊髓組織主要表現(xiàn)為溶解、壞死形成為主，并伴隨組織空洞開始形成；28d時空洞基本形成，空洞周圍有致密瘢痕。治療組各時間點(diǎn)損傷脊髓組織壞死較輕，14d、28d時空洞面積縮小。損傷組術(shù)后7d白質(zhì)出現(xiàn)明顯脫髓鞘改變，并隨著損傷后時間延長而逐漸加重；術(shù)后2

5、8d，損傷周圍組織出現(xiàn)空泡狀改變。治療組各時間點(diǎn)脫髓鞘及髓鞘排列紊亂情況有所改善。損傷組術(shù)后7d尼氏小體開始聚集，14d時聚集加重，28d時幾乎完全崩解。治療組大鼠各時間點(diǎn)尼氏小體損害程度較輕。
　　2.免疫熒光和western blot檢測顯示，在正常大鼠脊髓中，GAP-43大量表達(dá)于脊髓灰質(zhì)中，而脊髓白質(zhì)中未見表達(dá)。在脊髓打擊損傷后，GAP-43于脊髓灰質(zhì)中表達(dá)開始下降，并隨著損傷后時間延長而下降明顯；在28d時表達(dá)最低；AP

6、S治療組GAP-43表達(dá)趨勢與損傷組一樣，但在相同時間相點(diǎn)，GAP-43表達(dá)與損傷組相比有所增高，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。MAP2在正常組中主要在灰質(zhì)中表達(dá)，未見在白質(zhì)中表達(dá)；損傷后7d，MAP2表達(dá)開始下降，隨損傷時間延長，表達(dá)逐漸減少；APS干預(yù)后，MAP2表達(dá)也呈現(xiàn)降低趨勢。與損傷組相比，表達(dá)量明顯增高，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：APS能減輕脊髓損傷后組織病理損害，促進(jìn)運(yùn)動功能改善。其作用的可能