原生質(zhì)體誘變及抗性選育L-組氨酸產(chǎn)生菌.pdf

1、湖北工業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文原生質(zhì)體誘變及抗性選育L-組氨酸產(chǎn)生菌姓名：梁亮申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化工指導(dǎo)教師：邱雁臨20080501湖北工業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文A b s t r a c tA c c o r d i n g t o t h e t h e o n ， o f m e t a b o l i c c o n t r o l f e 咖e n t a t i o n ，( ’D 刪，l P 婦c 把廠脅所g 腸細(xì)歷記H 所

2、島J J 4 w a sa d o p t e da s s t a n i n g s t r a i n i n t h i s d i s s e r t a t i o n f o rb r e e d i n g o fI ，h i s d i t i n ep r o d u c i n g s t r a i n ．T h e m a i nc o n t e n t sa n d r e s u l t sa sf b

3、l l o w s ：①Q(mào) u a n t i f i c a t i o n o fL 廣h i s t i d i n e c o n c e n t r a t i o n i n f e r m e n t e db r o t h b y “A d d i t i o n a lP a u l l V ”．C o n s e q u e n t l Vo b t a i na f o 硼u l aV = 1 2 ．0 3 6

4、x + O ．0 0 7 5w i t hc o 丌e l a t i o nc o e f f i c i e n to fR z = 0 ．9 9 8 9b Vt h eb l a n kb a s eo fS 9 川ff e 咖e n t e db r o t hw “hd e i m i d a z o l y l e db yZ n 計(jì)f 如m Z n S 0 4 ，f o rP a u l l yr e a c t i o

5、nw a s l i a b l e t o C a “，M 曠+ ，N H 4 ”e t c ．i nt h eb r o t h ，w i t h o u t a d d i t i o n a lp r o c e d u r ec o m p a r e d t ot r a d i t i o n a lP a u l l y ．②( ' 0 n f o n n a t i o n o f s u s p e n d

6、e d c e l l d e n s i t y d e t e 冊(cè)i n e d b y s p e c t l ‘o p h o t o m e t e r ．C o n s e q u e n t l V o b t a i n af b 珊u l a V = O ．3 4 4 8 x —O ．0 0 4 3 w i t h c o r r e l a t i o n c o e 彤c i e n t o fR 2 = O ．9

7、 9 9 2u n d e rO D 6 2 0 w i t hp h y s i o l o g i c a ls a l ts o l u t i o nf o rb l a n k b a s e ；’n l et i m i n g 0 ff b 姍e r c u l t u r eo f 1 2 h a n d s e e dc u l t u r e O f 1 2 h ．③C D 秒咒e 6 口c 絕r f H 小g f

8、H f n m i c M ，，lS 9 n 4w a sa ( 1 0 p t e d 舔s t a r t i n gs t r a i n s c r e e nb yM Pa f } t e r m u t a t i o n o fU V ，N a N 0 2 卸d L i C l i n t h e f o n n o f s o l o a n d c o m p o s i t i o n ．C o n s e q u

9、e n t l yY 1 f r o m N a N 0 2w i t h L h i s d i t i n e y i e l d o f2 4 8 m g ／L 鋤d ”1 lf r o mc o m p o u n d m u t a t e d o f U V a n d L i C l o f 2 5 7 m g ／L w a s s c r e e n o u t ．④A t t a i nt h e p r o t o

10、p l a s to f ( b ，y 雅e 6 口c f 已，．f “，”g ，H f 口，珂f c 正f ，”．$ J J 垂T h ep r o t o p l a s ty i e l d o f9 8 ．9 0 ％f r o mM Sc u l t u r ew j t h a d d i t i o n a l2 ％g l y c i n e f o r p r e c u l t u r ea t f i r s t ，s

11、 o d i u mp e n i c i l l i np r e t r e a t m e n tu n d e r 6 ．7 U ／m Ll a t e rf o r2 h ，2 0 0 0 U ／m L1 2 h ·e n z y m o l y s i sw i t hl v s o z v m e a tl a s t ，f i n a l l yr e v i v e dr a t ew a s 1 0 ．6

12、7 ％i ns i n 西el a y e ri s o s m o t i cM S c u l t u r ew i t h a d d i t i o n a l0 ．5 m o l ／Ls u c r o s e ．⑤E x p l o i t a t i o n d u p l i c a t i v e p l a t ef b rp r i m a r ys c r e e n i n gi n l i g h t o f

13、t r a y f e n n e n t e r ．B e s i d e t h ei d e n t i f i c a t i o nw a s p r o v e d b y s h a k e n a s k f b r t h e1 j h i s d i t i n e y i e l ds e q u e n c e o fm u t a t e ds t r a i n ，i t ’s c h a r a c t e

14、 r i z e dt i m e ．s a v i n ga n dc u I t u r es a v i n g ，m e a n w h i l ei n f e c t i v el i a b i l i t yw a s a l s 0c o n f i 衄e d ．⑥、M t n e s so f m u t a t i o ne f f c c tf 幻mt h ep r o t o p l a s tb u i l

15、t - a n d - r e b u i l t ．I t ’ss h o w nb y L Y lw i t hI ，h i s d i t i n ey i e l d o f 2 6 5 m g ，L ，s c r e e n b y l o w c o n c e n t r a t i v eM P ’D H ，4 一A Uf r o mt h ep r o t o p l a s to f C D 刪以e 6 口c f e

16、 ，．f “mg m 缸m f c “優(yōu)L 乃j w i t h o u t m u t a t e d ．⑦F i n a l l y ，a h i 曲r e s i s t a n c e ( M P 。+ D H ‘+ 4 - A U ‘+ T R A ‘) L - h i s d i t i n e p r o d u c i n gs t r a i nU N 2 6 2 2 1 w i t h L h i s d i t i

17、 n e y i e l d o f 2 0 9 3 m ∥L b e f o r e f e m l e n t a t i v e c o n d i t i o n a l0 p t i m i z a t i o nw a s b r e e db ys t e p w i s em u t a t i o n i n t h ef o n l lo fp r o t o p l a s ta n ds t e p w i s