光刺激對母雞間腦c-fos基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的:通過對FOS蛋白的檢測，來確定由光照刺激引起的c-fos基因在母雞間腦內(nèi)的表達(dá)，由此來探究光照對雞生殖性能--即母雞產(chǎn)蛋量的影響，為進(jìn)一步了解光照對雞產(chǎn)蛋的影響機(jī)理打下基礎(chǔ)。 方法:首先，對母雞進(jìn)行光照刺激，將母雞右眼遮光7天后接受201x的光照刺激1.5h，暗適應(yīng)1.5h。經(jīng)遮光和光照刺激后，用兩種方法檢測FOS蛋白:1)免疫組化方法，灌流固定，取腦制作石蠟切片。通過免疫組化方法檢測c-fos基因在間腦的表達(dá)，確定FOS

2、蛋白出現(xiàn)最多的神經(jīng)核團(tuán):2)蛋白印跡法，對母雞進(jìn)行光照刺激后，直接斷頭，將雞頭在冰上迅速冷卻，然后在低溫環(huán)境下剝離出雞腦。將剝離出來的雞大腦用錫紙包好，迅速放于-80℃冰箱中冷凍。將冷凍后的雞腦搗碎，10000轉(zhuǎn)/秒離心，提取上清液，測出提取液中的蛋白含量，然后用蛋白印跡法來驗證提取液中是否含有FOS蛋白，以此來再次驗證FOS蛋白在雞腦中的存在。 結(jié)果:1)免疫組化結(jié)果顯示，經(jīng)DAB顯色后Fos樣免疫反應(yīng)陽性物質(zhì)呈棕黃色顆粒，細(xì)

3、胞核與胞漿都有Fos蛋白的表達(dá)，但主要位于細(xì)胞核內(nèi)，間腦內(nèi)有大量Fos樣免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元，主要見于左側(cè)，分布于圓核(ROT)、室旁核(PVN)、前背外側(cè)核(DLA)、外側(cè)膝狀核腹側(cè)部(GLv)和韁核(HB)等核團(tuán)內(nèi)，其中ROT、和PVN內(nèi)免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元最多。 2)蛋白印跡法(western blot)檢測的結(jié)果顯示，49kD到90kD間有明顯特異條帶，即FOS蛋白條帶，證明在母雞腦蛋白提取液中有FOS蛋白存在。 結(jié)