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1、目的:復(fù)制硝酸甘油型偏頭痛大鼠模型,觀察“和解止痛顆?!睂?duì)偏頭痛大鼠模型行為學(xué)的影響。采用免疫組化法對(duì)大鼠腦組織切片進(jìn)行染色,觀察“和解止痛顆?!睂?duì)偏頭痛大鼠模型三叉神經(jīng)脊束核c-fos、c-jun基因表達(dá)的影響。從基因表達(dá)角度探究“和解止痛顆粒”臨床療效的機(jī)理,為“和解止痛顆粒”治療偏頭痛的臨床療效提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
方法:健康Wistar大鼠60只,雌雄各半,隨機(jī)分為6組:空白組、模型組、鹽酸氟桂利嗪組、和解止痛顆粒高、中、
2、低劑量組。適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后,空白組及模型組以生理鹽水灌胃,鹽酸氟桂利嗪組以鹽酸氟桂利嗪溶液(0.89克/千克/日)灌胃,中藥各治療組則以換算后的和解止痛顆粒溶液高、中、低劑量(2.14克/千克/日,1.07克/千克/日,0.54克/千克/日),灌胃,共灌胃15天。最后一次灌胃半小時(shí)之后,除空白組大鼠皮下注射生理鹽水外,余各組大鼠于頸背部皮下注射硝酸甘油造模,觀察各組大鼠行為學(xué)變化。造模成功4小時(shí)之后處死大鼠,取出腦組織,制備標(biāo)本,對(duì)目標(biāo)
3、組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。光鏡下觀察各組大鼠腦組織切片c-fos、c-jun的表達(dá)。采用ImagePro Plus6.0對(duì)切片中陽性細(xì)胞總數(shù)及光密度進(jìn)行分析,并做統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
結(jié)果:皮下注射硝酸甘油5~10min后,除空白組大鼠之外的各組大鼠均出現(xiàn)耳紅、搔頭、攀籠、往返運(yùn)動(dòng)等不安表現(xiàn),提示造模成功。其中,鹽酸氟桂利嗪組及中藥各治療組大鼠行為學(xué)變化持續(xù)時(shí)間較模型組短,有顯著性差異,P<0.05。模型組及各藥物治療組大鼠切片c-f
4、os、c-jun陽性細(xì)胞數(shù)及光密度高于空白組大鼠,P<0.05,有顯著性差異。各藥物治療組大鼠c-fos、c-jun陽性細(xì)胞數(shù)及光密度較模型組少,P<0.05,有顯著性差異。
結(jié)論:1.偏頭痛發(fā)作時(shí),大鼠模型三叉神經(jīng)脊束核c-fos、c-jun的基因表達(dá)明顯增多,可作為內(nèi)源神經(jīng)源性炎癥啟動(dòng)的標(biāo)志之一。2.“和解止痛顆粒”能夠縮短大鼠耳紅時(shí)間,減少大鼠搔頭及攀籠次數(shù),明顯減少腦干c-fos、c-jun蛋白的表達(dá),有一定治療并預(yù)防
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