γ-氨基丁酸A受體激動(dòng)劑對(duì)新生大鼠海馬神經(jīng)元癲癇樣放電的影響.pdf

1、目的：通過新生大鼠海馬神經(jīng)元體外癲癇樣放電模型，探討γ-氨基丁酸A受體（GABAa受體）激動(dòng)劑（氯硝西泮、蠅蕈醇、異孕烷醇酮）對(duì)發(fā)育期海馬神經(jīng)元癲癇樣放電的影響。評(píng)估γ-氨基丁酸（GABA）能神經(jīng)元在中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）發(fā)育早期介導(dǎo)的作用。
　　方法：采用出生24小時(shí)內(nèi)新生SD大鼠，取海馬組織，通過胰酶消化，吸管吹打法制備海馬神經(jīng)元，置于培養(yǎng)箱中（37℃、5％CO2、95%O2、飽和濕度)培養(yǎng)至第9天。用“無鎂細(xì)胞外液”孵育3小

2、時(shí)，建立體外癲癇樣放電模型，選擇表面光滑、輪廓清楚、活性良好的神經(jīng)元用于全細(xì)胞膜片鉗記錄。在形成高阻封接并破膜后，轉(zhuǎn)換到電流鉗模式下分別記錄以上三種GABAa受體激動(dòng)劑對(duì)新生大鼠海馬神經(jīng)元癲癇樣放電的作用。
　　結(jié)果：1、新生大鼠海馬神經(jīng)元癲癇樣放電模型的建立：新生大鼠海馬神經(jīng)元培養(yǎng)至第9天，外形飽滿，突起密集清晰并交織成密集的網(wǎng)絡(luò)。海馬神經(jīng)元在無鎂細(xì)胞外液中孵育3小時(shí)后，神經(jīng)元興奮性明顯增加，出現(xiàn)自發(fā)的反復(fù)癲癇樣放電。放電頻率5

3、-20Hz，幅度45-60Mv范圍，恢復(fù)正常細(xì)胞外液后能持續(xù)穩(wěn)定的放電。神經(jīng)元癲癇樣放電模型建立成功。2、GABAa受體激動(dòng)劑的干預(yù)結(jié)果：（1）氯硝西泮干預(yù)：在新生大鼠海馬神經(jīng)元癲癇樣放電模型中，氯硝西泮干預(yù)后與干預(yù)前相比，神經(jīng)元癲癇樣放電頻率及放電幅度未見明顯變化（p>0.05）。（2）蠅蕈醇干預(yù)：蠅蕈醇干預(yù)后，神經(jīng)元癲癇樣放電的頻率及放電幅度較干預(yù)前明顯下降（p<0.001）。（3）異孕烷醇酮干預(yù)：異孕烷醇酮干預(yù)后神經(jīng)元癲癇樣放電的

4、頻率及放電幅度較干預(yù)前明顯下降（p<0.001）。
　　結(jié)論：（1）無鎂細(xì)胞外液可以誘導(dǎo)新生大鼠海馬神經(jīng)元自發(fā)的反復(fù)癲癇樣放電，建立穩(wěn)定的癲癇樣放電模型。（2）GABAa受體激動(dòng)劑未加劇新生大鼠海馬神經(jīng)元癲癇樣放電而是依然介導(dǎo)抑制作用。（3）氯硝西泮對(duì)新生大鼠海馬神經(jīng)元癲癇樣放電未見明顯的抑制作用，可能與未成熟腦相關(guān)受體表達(dá)不全、神經(jīng)元持續(xù)自發(fā)放電GABA消耗殆盡及無鎂細(xì)胞外液孵育降低GABA能神經(jīng)元傳導(dǎo)有關(guān)。（4）蠅蕈醇、異孕烷