高糖、高胰島素對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞增殖及其TGF-β1、TIMP-1 mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的:通過(guò)觀察胰島素及不同濃度葡萄糖對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞(Hepatic stellate cell，HSC)增殖及其轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(Transforming growth factor beta 1，TGF-β1)、金屬蛋白酶組織抑制因子1(Tissue inhibitor of metalloproteinase，TIMP-1)mRNA表達(dá)的影響，以進(jìn)一步探討糖尿病性肝纖維化的發(fā)生機(jī)制，為臨床糖尿病相關(guān)性肝纖維化的發(fā)生和防治提供理論和

2、實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:將體外培養(yǎng)的大鼠肝星狀細(xì)胞株以單純高糖及高糖加高胰島素作為刺激因子，以甘露醇作為高滲透壓對(duì)照。分別設(shè)不加胰島素糖組和加胰島素糖組兩大組。不加胰島素糖組包括:正常糖組(5.6mmol/L)、高糖A組(15mmol/L)、高糖B組(25mmol/L)、高糖C組(35mmol/L)、甘露醇組(29.4mmol/L甘露醇+5.6mmol/L葡萄糖)；加胰島素糖組包括:胰島素正常糖組(5.6mmol/L糖+150nmol/L胰島素

3、)、胰島素高糖A組(15mmol/L糖+150nmol/L胰島素)、胰島素高糖B組(25mmol/L糖+150nmol/L胰島素)、胰島素高糖C組(35 mmol/L糖+150nmol/L胰島素)、胰島素甘露醇組(29.4 mmol/L甘露醇+5.6mmol/L葡萄糖+150nmol/L胰島素)。上述10組HSC培養(yǎng)一定的時(shí)間后，采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法測(cè)定各組細(xì)胞的吸光度值以明確HSC的增殖數(shù)目，3H

4、-胸腺嘧啶摻入法(3H-TDR摻入法)測(cè)肝星狀細(xì)胞DNA的Cpm值以明確HSC的增殖狀態(tài)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)(real-time fluorogenetic quantitative PCR，RT-FQ-PCR)測(cè)定各組肝星狀細(xì)胞TGF-β1、TIMP-1的mRNA表達(dá)。結(jié)果:1、HSC的吸光度值方面，不加胰島素糖組HSC吸光度值分別是:正常糖組:1.57±0.01、高糖A組:1.67±0.01、高糖B組:1.77±0.02、高糖C

5、組:1.85±0.02、甘露醇組:1.58±0.03。加胰島素糖組值分別是:胰島素正常糖組:1.55±0.18、胰島素高糖A組:1.66±0.02、胰島素高糖B組:1.75±0.06、胰島素高糖C組:1.81±0.02、胰島素甘露醇組:1.57±0.03。結(jié)果表現(xiàn)為HSC增殖呈葡萄糖濃度依賴性增加，相同糖濃度的加胰島素糖組HSC增殖較未加胰島素糖組無(wú)明顯增加。甘露醇組與正常糖組值比較、胰島素甘露醇組與胰島素正常糖組比較HSC吸光度值無(wú)統(tǒng)

6、計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。2、HSC DNA的Cpm值方面，不加胰島素糖組HSC DNA的Cpm值分別是:正常糖組:3419±180.37、高糖A組:7562±1239.61、高糖B組:9886+307.17、高糖C組:11516.50±3066.66、甘露醇組:3619±699.31。加胰島素糖組值分別是:胰島素正常糖組:29832±3229.95、胰島素高糖A組:40707.50±6331.83、胰島素高糖B組:42960±7029

7、.69、胰島素高糖C組:56275±7159.59、胰島素甘露醇組:45716±6218.03。結(jié)果表現(xiàn)為HSC DNA合成呈葡萄糖濃度依賴性增加，并且相同糖濃度的加胰島素糖組HSC DNA合成顯著高于未加胰島素糖組值(p<0.05)。甘露醇組較正常糖組變化不明顯，胰島素甘露醇組Cpm值高于胰島素正常糖組值。3、各組細(xì)胞均有TGF-β1、TIMP-1的mRNA表達(dá)，加胰島素糖組內(nèi)及未加胰島素糖組內(nèi)不同糖濃度間TGF-β1、TIMP-1的

8、mRNA含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4、總體趨勢(shì)上，加胰島素糖組TGF-β1的mRNA量減少，TIMP-1的mRNA量增多。結(jié)論:1、高糖可誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的大鼠HSC數(shù)目增殖，高糖合并胰島素時(shí)誘導(dǎo)的HSC數(shù)目增殖與單純高糖的作用無(wú)明顯差異，高滲透壓并不誘導(dǎo)HSC數(shù)目增殖。2、高糖及高胰島素均可誘導(dǎo)HSC DNA合成增加，高糖與胰島素并存時(shí)HSC DNA的增加顯著高于單純高糖的作用。單純高滲透壓時(shí)HSCDNA的含量并不增加，在高滲透壓情況下高胰島素能