高糖和不同濃度胰島素對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞活化和增殖影響.pdf

1、目的：觀察高糖、不同濃度胰島素對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞（HepaticStellate Cell，HSC）增殖、p65蛋白量表達(dá)的影響，進(jìn)一步探討糖尿病性肝纖維化的發(fā)生機(jī)制，為臨床糖尿病性肝纖維化的治療提供更佳方案。方法：用不同濃度胰島素、單純高糖及高糖加胰島素作為刺激因子，以甘露醇作為高滲透壓對(duì)照、5.6mmol/L葡萄糖作為正常對(duì)照組，觀察體外培養(yǎng)大鼠HSC在不同刺激因子作用下的動(dòng)態(tài)變化。具體每組刺激因子（分組）如下：A：正常糖組（5.6m

2、mol/L）、B：高糖組（25 mmol/L）、C：正常糖（5.6mmol/L）+高胰島素組（10-6mol/L）、D：高糖（25 mmol/L）+高胰島素組（10-6mol/L）、E：正常糖（5.6mmol/L）+中胰島素組（10-8mol/L）、F：高糖（25 mmol/L）+中胰島素組（10-8mol/L）、G：正常糖（5.6mmol/L）+低胰島素組（10-9mol/L）、H：高糖（25 mmol/L）+低胰島素組（10-9mo

3、l/L）、I：甘露醇組（25mmol/L）。在以上每組刺激因子作用下，大鼠HSC連續(xù)外培養(yǎng)24、48、72小時(shí)。①在培養(yǎng)24、48、72小時(shí)后，通過Cell Counting Kit-8（CCK-8）法檢測(cè)HSC的增殖情況并繪制生長(zhǎng)曲線。②24小時(shí)后用免疫印跡法測(cè)定各組HSC p65蛋白量的表達(dá)。結(jié)果：培養(yǎng)24小時(shí)，與A組相比，各組吸光度值變化不大，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。48小時(shí)后，與A組值相比，C組和E組吸光度值顯著升高，

4、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），B、C、E、G、H、I組吸光度值沒有顯著變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。72小時(shí)后，與A組相比，F(xiàn)、G、H、I組吸光度值明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），B、C、D、E組吸光度值無(wú)明顯變化，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。②免疫印跡法顯示：24h時(shí)HSC總NF-кBp65蛋白表達(dá)INT比值分別為： A組：0.549±0.044；B組：0.893±0.044；C組：1.360±0.038；D組

5、：0.810±0.044；C組：1.036±0.053；F組：0.613±0.040；G組：0.840±0.055；H組：0.846±0.060；I組：0.572±0.032。不同濃度胰島素、高糖、胰島素加高糖作用于大鼠HSC后p65蛋白量的表達(dá)與正常糖組比較均有統(tǒng)計(jì)意義（P<0.01）；C、E、G組p65蛋白量的表達(dá)明顯增加（P<0.01），單因素分析顯示，各組p65蛋白表達(dá)量隨著胰島素濃度升高也顯著增多，并呈線性相關(guān)（P<0.01）