2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、干擾素是第一個(gè)被用于臨床治療人類腫瘤的細(xì)胞因子,在體內(nèi)和體外試驗(yàn)中其抗增生和免疫調(diào)節(jié)作用是毋庸置疑的。在針對(duì)多種腫瘤的研究中,Ⅰ型干擾素尤其是IFNβ的抗腫瘤增殖作用更為明顯.國(guó)內(nèi)外的基礎(chǔ)研究正從分子水平試圖揭示其復(fù)雜的直接作用或協(xié)同調(diào)節(jié)的機(jī)制,但是,更多的目光還是投向了對(duì)其生物學(xué)作用的利用上。生理?xiàng)l件下,許多體內(nèi)的細(xì)胞因子低度表達(dá),由于機(jī)體的自穩(wěn)系統(tǒng)而受到嚴(yán)格的分泌調(diào)控,并且這些細(xì)胞因子的半衰期極短,蛋白清除率較高,所以血藥濃度很低,

2、IFNβ也不例外;但是治療作用的IFNβ血藥濃度較高,如果人為的靜脈給藥使血藥濃度增高到最大耐受劑量,由于以上原因,血藥濃度水平不僅不能維持穩(wěn)定,而且會(huì)導(dǎo)致極大的系統(tǒng)毒副作用,無法達(dá)到抗增生作用。提高局部藥物濃度能夠解決這一問題。 腺病毒載體是一個(gè)相對(duì)成熟的病毒載體,國(guó)外早已用腺病毒載體開展了Ⅲ期臨床試驗(yàn),并在單基因遺傳性疾病和某些腫瘤的治療中凸顯療效。早期的腺病毒載體存在著較強(qiáng)的免疫原性,且由于腺病毒呈一過性表達(dá),需要反復(fù)使用

3、,存在發(fā)生嚴(yán)重免疫反應(yīng)的可能性;另外包裝過程中復(fù)制型病毒的產(chǎn)生也給臨床應(yīng)用帶來風(fēng)險(xiǎn)。但現(xiàn)在腺病毒構(gòu)建的方法和載體本身已經(jīng)被多次優(yōu)化,和其他載體比較,其優(yōu)點(diǎn)已超過其局限性。 在我國(guó)處于腫瘤發(fā)病率逐年增高的形勢(shì)下,我們希望通過構(gòu)建IFNβ的腺病毒載體,結(jié)合前期對(duì)骨髓間質(zhì)干細(xì)胞的研究,找到一個(gè)合適的、能夠富集于腫瘤局部發(fā)揮IFNβ生物學(xué)作用的腫瘤疫苗,為促進(jìn)其早日成為安全高效的腫瘤治療藥物奠定基礎(chǔ)。 材料與方法 1從健

4、康人外周血中提取出基因組DNA,以此為模版,用pyrobestTaq酶PCR法擴(kuò)增出hIFNβ基因片段。將目的基因克隆入中間載體pMD-18T載體,經(jīng)藍(lán)白篩選和PCR篩選后測(cè)序,證實(shí)序列無誤; 2酶切出目的基因并將之克隆入穿梭載體pAdTrack-CMV中,將新形成的pAdTrack-CMV-hIFNβ用限制性內(nèi)切酶PmeⅠ線性化,與腺病毒骨架質(zhì)粒pAdEasy-1共轉(zhuǎn)染大腸桿菌株BJ5183細(xì)胞中??敲顾丶懊盖泻Y選出重組子p

5、Ad-hIFNβ; 3內(nèi)切酶pacⅠ再次將重組子線性化,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染細(xì)胞株HEK293。借助GFP的表達(dá)可以跟蹤觀察包裝病毒Ad-hIFNβ的產(chǎn)生。重組腺病毒載體感染293細(xì)胞進(jìn)行病毒擴(kuò)增,經(jīng)過四次擴(kuò)增,純化后,用空斑形成實(shí)驗(yàn)法測(cè)定病毒滴度;4RT-PCR法證實(shí)hIFNβ基因. 結(jié)果 各中間載體經(jīng)PCR法,限制性酶切分析,DNA測(cè)序證實(shí)正確。轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞中2-3天產(chǎn)生病毒,7-10天出現(xiàn)病毒斑。最終的包裝病毒中

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