人工血管攜腺病毒介導血管內(nèi)皮生長因子基因?qū)?nèi)皮細胞生長的影響.pdf

1、背景： 小口徑人工血管移植術(shù)后出現(xiàn)內(nèi)膜增生和血栓形成，導致通暢率不理想，主要是因為人工血管表面缺乏完整的內(nèi)皮層。目前已經(jīng)證實通過人工血管表面快速內(nèi)皮化可以減少再狹窄的發(fā)生。人工血管內(nèi)皮化的研究已經(jīng)從種植內(nèi)皮細胞進展到基因分子水平。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是誘導血管內(nèi)皮細胞生長作用最強、特異性最高的一種生長因子。VEGF蛋白涂層和基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)染都有其明顯的缺陷。而腺病毒作為載體轉(zhuǎn)染取得了很好的效果。 目的： 觀察

2、人工血管攜帶腺病毒介導的VEGF基因轉(zhuǎn)染內(nèi)皮細胞的效果、VEGF基因和蛋白的表達以及對內(nèi)皮細胞生長的影響。 材料和方法： 1.ad5-EGFP轉(zhuǎn)染EAhy926轉(zhuǎn)染率的測定。 2.人工血管攜帶腺病毒在靜水中的釋放情況。 3.人工血管上內(nèi)皮細胞的貼附情況。 4.ad5-VEGF165-IRES-EGFP轉(zhuǎn)染EAhy926，RT-PCR半定量檢測VEGF基因水平表達。 5.人工血管攜帶ad5-

3、VEGF165-IRES-EGFP轉(zhuǎn)染EAhy926，ELISA法檢測VEGF蛋白水平表達。 6.人工血管攜帶ad5-VEGF165-IRES-EGFP轉(zhuǎn)染EAhy926，MTT法檢測對內(nèi)皮細胞生長的影響。 結(jié)果： 1.ad5轉(zhuǎn)染率隨MOI的增加而增加，MOI 200時達到87.3％。 2.人工血管上消化下來發(fā)熒光的細胞在最初的1h內(nèi)，下降最為明顯。稀釋液中基本沒有發(fā)熒光的細胞。 3.電鏡顯示內(nèi)皮

4、細胞貼附在人工血管上。 4.ad5-VEGF165轉(zhuǎn)染組RT-PCR有VEGF基因的表達，第3天比第1天表達強烈。對照組沒有表達。 5.ad5-VEGF165轉(zhuǎn)染組上清液中有VEGF蛋白的表達，呈上升趨勢第5天達峰后開始下降。對照組沒有表達。 6.ad5-VEGF165轉(zhuǎn)染組OD值呈快速上升趨勢，對照組上升緩慢。 結(jié)論： 1.ad5轉(zhuǎn)染EAhy926的最適MOI為200。 2.人工血管上攜

5、帶的病毒靜水中能在人工血管上保留1h左右，這是一個逐漸釋放的過程，而不是瞬時釋放。 3.內(nèi)皮細胞能夠附著在人工血管上。 4.ad5-VEGF165-IRES-EGFP能轉(zhuǎn)染EAhy926，hVEGF165基因水平成功表達。 5.人工血管攜帶ad5-VEGF165-IRES-EGFP能轉(zhuǎn)染EAhy926，hVEGF165蛋白水平成功表達6.人工血管攜帶ad5-VEGF165-1RES-EGFP能促進內(nèi)皮細胞的增殖。