成石性膽汁及膽管癌性膽汁對人肝門部膽管癌細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：通過觀察正常膽汁(NB)、成石性膽汁(CB)、膽管癌性膽汁(TB)對肝門部膽管癌細(xì)胞增殖的影響，探討膽道結(jié)石、膽管癌性膽汁與肝門部膽管癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。 方法：選擇我們建立并已穩(wěn)定傳代的肝門部膽管癌細(xì)胞系(FRH-0201)。將臨床采集的膽汁標(biāo)本離心(800r/min)，雙層濾膜(0.22um)除菌；分別作膽汁標(biāo)本濃度梯度稀釋及細(xì)胞毒性實驗，取得標(biāo)本終濃度以消除各組膽汁對細(xì)胞的毒性作用，分為4組(正常膽汁組NB、成石性膽

2、汁組CB、膽管癌性膽汁組TB及空白對照組)；經(jīng)過噻唑藍(lán)(MTT)比色實驗分別檢測不同組膽汁在終濃度對該細(xì)胞生長的影響以及比較同組內(nèi)同種膽汁不同膽汁濃度對細(xì)胞生長的影響；觀察各組膽汁作用后細(xì)胞生長曲線，計算細(xì)胞倍增時間；應(yīng)用流式技術(shù)檢測細(xì)胞周期、測定增殖指數(shù)(PI=(S+G2/M)％×100)，G0/G1期細(xì)胞比例及S期細(xì)胞比例；觀察細(xì)胞克隆形成以及光鏡及透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、內(nèi)部結(jié)構(gòu)等來檢測不同組膽汁作用后細(xì)胞活性、增殖能力。

3、結(jié)果：當(dāng)標(biāo)本終濃度為1％(0ul膽汁標(biāo)本/ml培養(yǎng)基)時所有膽汁對膽管癌細(xì)胞FRH-0201無明顯毒性作用。加入1％成石性膽汁(CB)及1％膽管癌性膽汁(TB)后細(xì)胞生長明顯加快，而正常膽汁(NB)則無明顯促進(jìn)作用；對照組、NB組、CB組和TB組細(xì)胞的對數(shù)生長期細(xì)胞倍增時間分別為24.1h、24.0h、17.9h、17.9h，CB、TB組對數(shù)期細(xì)胞倍增時間縮短；MTT實驗證明CB組和TB組細(xì)胞生長加快，細(xì)胞活性增加，CB、TB促進(jìn)細(xì)胞增

4、殖的能力明顯增強(qiáng)，以第48-72小時最明顯，CB、TB對細(xì)胞的增殖作用具有時間和濃度依賴性；1％CB組、1％TB組克隆形成率分別為(51.2±3.8)％、(50.0±2.9)％，明顯高于NB組的(34.4±4.2)％和對照組的(33.9±3.6)％；培養(yǎng)48小時后1％CB組S期細(xì)胞比例為(58.4±3.05)％，1％TB組S期比例為(46.6±0.35)％，均比正常對照組(29.75±1.77)％明顯增高(P＜0.05)；CB組G0/G

5、1期細(xì)胞比例為(39.55±4.75)％，TB組G0/G1期細(xì)胞比例為(35.33±3.03)％，均比正常對照組(69.75±1.06)％明顯降低(P＜0.05)；CB組、TB組和對照組細(xì)胞增殖指數(shù)分別為(59.88±3.98)％、(62.43±3.90)％、(30.25±1.07)％；CB組、TB組和正常對照組細(xì)胞凋亡率分別為(7.76±2.07)％、(8.71±1.4)％和(16.8±3.94)％，CB組及TB組膽汁均影響細(xì)胞凋亡(

6、P＜0.05)。 結(jié)論：本實驗發(fā)現(xiàn)成石性膽汁、膽管癌性膽汁能明顯促進(jìn)膽管癌細(xì)胞FRH-0201的增殖，而正常膽汁未見明顯促癌活性。成石性膽汁和膽管癌性膽汁培養(yǎng)細(xì)胞倍增時間縮短，細(xì)胞周期S期比例明顯升高，G0/G1期細(xì)胞比例降低，細(xì)胞增殖指數(shù)升高，細(xì)胞活性增加。成石性膽汁、膽管癌性膽汁的促增殖作用是通過改變癌細(xì)胞的細(xì)胞周期以及影響細(xì)胞的凋亡機(jī)制兩個方面實現(xiàn)的。成石性膽汁明顯的促癌活性為成石性膽汁與膽管癌病因?qū)W方面研究提供了直接證據(jù)