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文檔簡介
1、目的：構建含人乳腺癌DF3/MUC1啟動子轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列和白喉外毒素A鏈(DTA)基因的重組表達載體，同時探討轉(zhuǎn)入靶向DF3/MUC1的白喉毒素A鏈(DTA)基因?qū)θ橄侔┘毎飳W行為的影響。 方法：利用PCR技術從人乳腺癌細胞MCF-7中擴增出DF3/MUC1啟動子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列并克隆入pGL3-Basic載體，構建重組質(zhì)粒pGL3-DF3，將其瞬時轉(zhuǎn)染DF3陽性的乳腺癌細胞株MCF-7和DF3陰性的乳腺癌細胞株 MDA
2、-MB-231，熒光素酶定量分析檢測啟動子的活性。從質(zhì)粒pIBI30-DTA中切下DTA片斷，以DTA基因替換重組質(zhì)粒pGL3-DF3中的蟲熒光素酶基因，構建重組質(zhì)粒pGL3-DF3-DTA。將構建的pGL3-DF3-DTA真核表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染DF3陽性的乳腺癌細胞系，轉(zhuǎn)染經(jīng)RT-PCR證實目的基因已轉(zhuǎn)入細胞內(nèi)，24h后對轉(zhuǎn)入基因的腫瘤細胞的生物學行為進行觀察。 結(jié)果：成功地構建了含人乳腺癌DF3/MUC1啟動子轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列和DTA
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