RNA結(jié)合蛋白HuR對(duì)乳腺癌細(xì)胞中PDGFC的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，發(fā)病率居女性惡性腫瘤之首，死亡率僅次于肺癌，就診時(shí)大部分患者已發(fā)生轉(zhuǎn)移，成為女性的“頭號(hào)殺手”。乳腺癌發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因素參與的過(guò)程，其發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚，但相關(guān)信號(hào)通路紊亂以及多基因表達(dá)失調(diào)是重要原因，因此研究乳腺癌演變過(guò)程中的基因表達(dá)，對(duì)于乳腺癌的診治具有非常重要的理論意義和臨床價(jià)值。
　　血小板衍生生長(zhǎng)因子（platelet-derived growth factor，PDGF），其家族主

2、要由PDGFA、B、C、D四個(gè)成員組成，它們通過(guò)形成異源二聚體或者自身相互作用，從而產(chǎn)生五種形式，即PDGF-AA、-AB、-BB、-CC和-DD。PDGF受體PDGFR-α和PDGFR-β在腫瘤細(xì)胞以及基質(zhì)細(xì)胞中具有大量表達(dá)，當(dāng)PDGF和其受體PDGFR-α、PDGFR-β結(jié)合時(shí)，能夠激活下游信號(hào)，發(fā)揮其生物學(xué)功能。
　　血小板衍生生長(zhǎng)因子C（PDGFC）屬于PDGF家族新成員，在多種組織細(xì)胞大量表達(dá)，包括乳腺癌在內(nèi)的多種腫瘤細(xì)

3、胞中亦廣泛表達(dá)，最早發(fā)現(xiàn)于血小板α顆粒。腫瘤基質(zhì)細(xì)胞成纖維細(xì)胞能夠大量表達(dá)其受體，活化的受體通過(guò)激活酪氨酸激酶通路介導(dǎo)成纖維細(xì)胞活化，參與多種細(xì)胞因子的分泌以及腫瘤微環(huán)境的形成，有關(guān)PDGFC在腫瘤基質(zhì)細(xì)胞中的作用機(jī)制研究相對(duì)較少。目前研究發(fā)現(xiàn)PDGFC在促進(jìn)血管生成方面具有重要作用，過(guò)表達(dá)的PDGFC促進(jìn)血管異常化，其表達(dá)在乳腺癌起始、發(fā)生及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著顯著作用。乳腺腫瘤細(xì)胞調(diào)節(jié)PDGFC表達(dá)的具體機(jī)制尚未清楚，深入探討其調(diào)節(jié)機(jī)制，是

4、認(rèn)識(shí)乳腺癌發(fā)病機(jī)制的關(guān)鍵。
　　人抗原R（human antigen R，HuR）屬于胚胎致死性異常視覺(jué)（embryonic lethal abnormal vision，ELAV）基因家族成員，ELAV家族主要成員包括HuR、HuB、HuC及HuD四種，在細(xì)胞中，它們主要通過(guò)基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)機(jī)制調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)。HuR是ELAVL家族中研究的最為充分的mRNA結(jié)合蛋白，在機(jī)體組織細(xì)胞中廣泛表達(dá)，主要定位于細(xì)胞核，在缺氧、炎性細(xì)胞

5、因子等因素刺激下，其細(xì)胞質(zhì)表達(dá)明顯增高。近年來(lái)研究表明，HuR蛋白是免疫細(xì)胞激活、肌肉分化、細(xì)胞分裂衰老等生命活動(dòng)的重要調(diào)節(jié)基因，在轉(zhuǎn)移性乳腺癌中高度活化。乳腺癌細(xì)胞中HuR的過(guò)表達(dá)與腫瘤大小，組織分化及生存率等密切相關(guān)，我們的前期研究也表明，HuR能夠增強(qiáng)Snail的表達(dá)，促進(jìn)乳腺腫瘤的轉(zhuǎn)移。所有這些高度提示，HuR有可能調(diào)節(jié)一些下游靶基因，通過(guò)一種自分泌或旁分泌的方式參與乳腺腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化。那么，在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，HuR是否

6、調(diào)節(jié)PDGFC的表達(dá)？調(diào)節(jié)機(jī)制又是怎樣呢？這是本研究所要解決的問(wèn)題。
　　越來(lái)越多的研究表明，轉(zhuǎn)錄后調(diào)控是通過(guò)某種RNA結(jié)合蛋白及miRNA等介導(dǎo)實(shí)現(xiàn)的。在基因的表達(dá)調(diào)控中，轉(zhuǎn)錄后調(diào)控作為一種精細(xì)的調(diào)控模式在基因的表達(dá)以及細(xì)胞命運(yùn)的決定中起著重要的作用。RNA結(jié)合蛋白HuR通過(guò)與靶基因mRNA結(jié)合，在mRNA的加工、修飾、穩(wěn)定性等方面發(fā)揮著重要作用，最終導(dǎo)致靶基因相關(guān)的生物學(xué)功能異常。
　　本研究著眼于探討PDGFC的調(diào)控機(jī)

7、制。結(jié)合文獻(xiàn)并通過(guò)生物信息學(xué)分析，我們發(fā)現(xiàn)PDGFC的3’端非翻譯區(qū)（3’untranslated region，3’UTR）具有HuR的結(jié)合位點(diǎn)，提示PDGFC可能是HuR調(diào)控的靶基因并受其轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)?；谝陨霞僭O(shè)，通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR、Western blot、RNA-IP、報(bào)告基因系統(tǒng)等實(shí)驗(yàn)明確了HuR對(duì)PDGFC的分子調(diào)控機(jī)制，并進(jìn)一步探討了PDGFC在乳腺腫瘤發(fā)生發(fā)展及預(yù)后中的作用。
　　本研究取得以下初步結(jié)論：
　

8、　1.PDGFC在乳腺癌組織和細(xì)胞中呈現(xiàn)高表達(dá)，并與患者預(yù)后及腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為相關(guān)。
　　2.乳腺癌細(xì)胞中PDGFC和HuR表達(dá)呈正相關(guān)。PDGFC的調(diào)控發(fā)生在轉(zhuǎn)錄后水平，軟件預(yù)測(cè)分析發(fā)現(xiàn)，PDGFC3’UTR存在HuR的結(jié)合位點(diǎn)。
　　3.HuR通過(guò)與PDGFC mRNA3’UTR結(jié)合上調(diào)PDGFC的表達(dá)。
　　4.乳腺癌中應(yīng)激誘導(dǎo)HuR上調(diào)PDGFC。H2O2活化和紫外線（UV）照射乳腺癌細(xì)胞，誘導(dǎo)HuR表達(dá)，從