間隙性應(yīng)用甲狀旁腺激素（PTH）對(duì)大鼠成骨細(xì)胞蛋白譜的影響.pdf

1、目的：間隙性PTH應(yīng)用于大鼠和人都可以促進(jìn)骨形成，但是其作用機(jī)理尚未明確。本研究試圖通過(guò)蛋白質(zhì)組學(xué)方法來(lái)比較間隙性PTH刺激組大鼠成骨細(xì)胞與對(duì)照組大鼠成骨細(xì)胞的蛋白質(zhì)表達(dá)譜，初步探討間隙性PTH應(yīng)用促成骨的可能機(jī)制。 方法：在每個(gè)為期24小時(shí)的細(xì)胞培養(yǎng)周期中，大鼠成骨細(xì)胞(ROB)與PTH在前6小時(shí)共孵育，后18小時(shí)與PTH溶劑共孵育(PTH間隙刺激組)；或整個(gè)周期中僅與PTH溶劑共孵育(對(duì)照組)。在第3周期的第6小時(shí)末(PTH

2、間隙刺激組稱Itm6h，對(duì)照組稱Ctr6h)、24小時(shí)末(PTH間隙刺激組為Itm24h，對(duì)照組為Ctr24h)分別收集細(xì)胞，裂解液溶解細(xì)胞蛋白。利用雙向電泳方法分離細(xì)胞蛋白質(zhì)，并用ImageMaster圖像分析軟件比較這二組細(xì)胞的蛋白質(zhì)圖譜，隨機(jī)選擇一些差異蛋白質(zhì)點(diǎn)，應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸離子化-飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)測(cè)定其膠內(nèi)酶解后的肽質(zhì)量指紋圖譜，通過(guò)Mascot軟件查詢Swiss-prot數(shù)據(jù)庫(kù)。 結(jié)果：

3、我們獲得了重復(fù)性好的成骨細(xì)胞蛋白質(zhì)圖譜。分析蛋白質(zhì)圖譜發(fā)現(xiàn)Itm6h較Ctr6h有7種蛋白表達(dá)下調(diào)，選取其中5個(gè)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)，鑒定結(jié)果為：F-actincappingbetasubunit，phenylalanine-tRNAsynthetase-likesubunit，Ppprotein，IL-22R-alpha-2以及一個(gè)未知功能蛋白；Itm24h較Ctr24h有14種蛋白表達(dá)上調(diào)，有5種蛋白表達(dá)下調(diào)，選取其中14個(gè)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)，經(jīng)鑒定

4、得知在Itm24h中表達(dá)上調(diào)的蛋白質(zhì)分別是：beta-actin，Vimentin，GRP78，GrpE-like1，GrpEproteinhomolog1，PDIprecursor,ERP29precursor,GDIalpha，proteinDJ-1，Galactokinase1，IGFBP-3precursor以及一個(gè)未知功能蛋白。這些差異表達(dá)的蛋白中大多數(shù)具有直接或間接調(diào)節(jié)某些細(xì)胞凋亡的功能。 結(jié)論：PTH間隙性刺激體外