缺氧對大鼠成骨細(xì)胞作用機(jī)制的研究.pdf

1、缺氧對大鼠成骨細(xì)胞作用機(jī)制的研究隨著人類社會的老齡化，骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病率逐漸增高，已經(jīng)成為老齡化社會的高發(fā)病率疾病。骨質(zhì)疏松癥發(fā)生的影響因素有很多，而隨著高原人口的迅速增加，高原醫(yī)學(xué)的發(fā)展，高原缺氧對骨質(zhì)疏松癥發(fā)病的影響也越來越受到關(guān)注。研究表明高原缺氧可以促進(jìn)骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生，但具體的作用機(jī)理目前尚不清楚。本文擬通過體外細(xì)胞培養(yǎng)的方法研究缺氧對大鼠成骨細(xì)胞功能的影響以及可能的機(jī)制。 第一部分大鼠成骨細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定 目

2、的：用酶消化法從新生 24hWistar 大鼠顱骨中分離成骨細(xì)胞，進(jìn)行體外培養(yǎng)和功能鑒定，為進(jìn)一步研究作準(zhǔn)備。 方法：用胰酶-膠原酶消化法從新生24h 內(nèi) Wistar大鼠顱骨中分離成骨細(xì)胞，用偶氮偶聯(lián)法顯示成骨細(xì)胞中堿性磷酸酶的表達(dá)，鈣化結(jié)節(jié)用茜素紅法、四環(huán)素標(biāo)記法、Von Kossa改良法染色。 結(jié)果：用酶消化法進(jìn)行新生24h內(nèi)Wistar大鼠成骨細(xì)胞培養(yǎng)，方便易行，可分離、培養(yǎng)大量高純度大鼠成骨細(xì)胞，這些成骨細(xì)胞在

3、體外傳代后，仍保留了它們的表型特征，可供進(jìn)一步研究使用。 第二部分缺氧對大鼠成骨細(xì)胞增殖、分化及礦化功能的影響 目的：探討缺氧對體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞增殖、分化及礦化功能的影響。 方法：應(yīng)用 MTT 法、對硝基苯磷酸鹽法及茜素紅染色方法檢測成骨細(xì)胞的增殖率、AKP表達(dá)及礦化結(jié)節(jié)數(shù)量。 結(jié)果：缺氧使成骨細(xì)胞增殖率、AKP活性及礦化結(jié)節(jié)形成數(shù)量明顯降低，并隨著缺氧時間的延長降低更加顯著。 結(jié)論：缺氧抑制了體

4、外培養(yǎng)成骨細(xì)胞的增殖及分化成熟，延長了礦化時間，使骨形成能力降低，骨形成與骨吸收失衡，這可能是缺氧促進(jìn)骨質(zhì)疏松癥形成的一個重要的發(fā)病機(jī)制。 第三部分缺氧對大鼠成骨細(xì)胞凋亡的影響 目的：探討缺氧對體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞凋亡的影響。 方法：應(yīng)用透射電鏡觀察、流式細(xì)胞技術(shù)(FCM)及丫啶橙染色法檢測成骨細(xì)胞的顯微變化及凋亡率。 結(jié)果：(1)缺氧促進(jìn)了成骨細(xì)胞內(nèi)凋亡小體的產(chǎn)生；(2)缺氧提高了成骨細(xì)胞的凋亡率，并與缺氧