豬氣道上皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)及其干細(xì)胞特異性抗原篩選的研究.pdf

1、肺臟是人體與外界進(jìn)行氣體交換的唯一器官，而肺臟氣道粘膜上皮經(jīng)常暴露于微生物、過(guò)敏原及污染源之中，易被侵蝕而造成損傷，同時(shí)肺臟上皮本身也在不斷進(jìn)行著自我修復(fù)來(lái)維持肺臟功能的正常。在這一損傷修復(fù)過(guò)程中，氣道上皮干/先祖細(xì)胞(Airwayepithelialstem/progenitorcell，EpiSPC)起著至關(guān)重要的作用。由此可見(jiàn)，分離鑒定EpiSPC的特性對(duì)了解氣道EpiSPC功能以及肺臟疾病的治療有著非常重要的意義。然而，由于臨床

2、人肺臟組織來(lái)源困難，這極大地限制了其肺臟組織形態(tài)學(xué)與干細(xì)胞生物學(xué)特性等相關(guān)研究;而在常用的動(dòng)物模型中，豬不但來(lái)源廣泛，而且它的肺臟無(wú)論在大小、解剖結(jié)構(gòu)、生理特性、還是在細(xì)胞生物學(xué)特征上都與人類肺臟極為相近，是人類肺臟的最佳研究模型之一。因此，我們對(duì)豬氣道上皮細(xì)胞形態(tài)組成學(xué)及干細(xì)胞特異性抗原標(biāo)記的篩選進(jìn)行了初步的研究，這對(duì)分離鑒定豬肺臟氣道上皮干細(xì)胞/先祖細(xì)胞亞群及其生物學(xué)特性研究有重要的意義，并為進(jìn)一步研究人類肺臟干細(xì)胞生物學(xué)特性及其在

3、維持肺臟動(dòng)態(tài)平衡、肺臟疾病發(fā)生機(jī)制和肺臟組織工程等方面的研究奠定了一定的理論基礎(chǔ)。
　　通過(guò)試驗(yàn)獲得以下結(jié)果:
　　1.豬氣道上皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)的研究:本試驗(yàn)采用組織化學(xué)(HE、PAS)和免疫組織化學(xué)(IHC)等方法對(duì)豬吸道的不同區(qū)段（氣管、支氣管和細(xì)支氣管）的主要上皮細(xì)胞類型進(jìn)行了形態(tài)學(xué)觀察，并對(duì)其組成比例進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果表明，豬氣道上皮主要由纖毛細(xì)胞、基底細(xì)胞、克拉拉細(xì)胞和杯狀細(xì)胞等細(xì)胞組成，并且在不同區(qū)段其上皮細(xì)胞的類

4、型與組成比例也有一定的差異;因此豬的這種氣道上皮細(xì)胞形態(tài)組成學(xué)特征與小鼠肺臟比更接近于人類，由此可見(jiàn)，豬肺臟在氣道上皮細(xì)胞組成上比小鼠肺臟更適合于人類肺臟疾病的研究。
　　2.豬EpiSPC特異性表面標(biāo)記物的篩選:試驗(yàn)中采用IFC染色，利用CD117、Sca-1、Sox2、CD49f和SSEA-1等10種相關(guān)EpiSPC抗體來(lái)鑒定豬氣管EpiSPC特異性表面抗原的表達(dá)情況。結(jié)果表明，在豬氣道組織冰凍切片中的染色中沒(méi)有檢測(cè)到所選用的

5、10種相關(guān)EpiSPC抗體的陽(yáng)性細(xì)胞，而在豬氣道上皮細(xì)胞爬片中的IFC染色中觀察到表達(dá)CD117和CD49f的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)較多。通過(guò)免疫熒光共染試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)具有共同表達(dá)CD117和Keratin14或CD49f和Keratin14的陽(yáng)性細(xì)胞。這說(shuō)明，在正常的生理?xiàng)l件下，豬氣道EpiSPC的數(shù)量極少，不易被檢測(cè)。但經(jīng)外界刺激（酶學(xué)消化）后，豬氣道EpiSPC數(shù)量增加易被檢測(cè)。因此，CD49f和CD117是豬氣道上皮干細(xì)胞分選標(biāo)記之一，基底細(xì)