IL-1β激活p38蛋白激酶增加胃腺癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的作用研究.pdf

1、胃癌是世界各地最為常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在我國(guó)，其發(fā)生率和死亡率占惡性腫瘤的第二位，侵襲和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致胃癌患者死亡的主要原因。因此，深入探討引起增加胃癌侵襲與轉(zhuǎn)移的作用及機(jī)制,進(jìn)一步抑制胃癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移,對(duì)于胃癌的臨床治療與預(yù)后具有深遠(yuǎn)的意義。白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）已被證實(shí)與胃腺癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，但其分子機(jī)制尚不清楚。p38蛋白激酶是絲裂原激活蛋白激酶（MAPK）家族的主要成員之一，是調(diào)控IL-1β信號(hào)通路的主要激酶。因此，

2、著眼于研究p38蛋白激酶在IL-1β介導(dǎo)的胃腺癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用及其機(jī)制。目前尚未見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。
　　目的：
　　探討IL-1β介導(dǎo)的p38蛋白激酶在胃腺癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用，并從細(xì)胞水平、臨床樣本、動(dòng)物水平三方面初步探討其作用機(jī)制，旨在闡明其作用及機(jī)制并為胃腺癌患者尋找一種新的治療方法提供良好的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1、應(yīng)用Western blot技術(shù)在胃腺癌細(xì)胞株中驗(yàn)證IL-1β是否能激活p

3、38蛋白激酶；
　　2、應(yīng)用RNA干擾技術(shù)(siRNA技術(shù))結(jié)合p38信號(hào)途徑特異性抑制劑SB202190和Transwell遷移侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)IL-1β激活p38蛋白激酶對(duì)胃腺癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響；
　　3、應(yīng)用siRNA技術(shù)結(jié)合p38信號(hào)途徑特異性抑制劑SB202190和RT-PCR檢測(cè)IL-1β激活p38蛋白激酶對(duì)胃腺癌細(xì)胞中MMP2、MMP9 mRNA表達(dá)的影響；
　　4、應(yīng)用siRNA技術(shù)，通過(guò)轉(zhuǎn)染MMP

4、2siRNA、MMP9 siRNA以及MMP2/MMP9 siRNA和應(yīng)用MMP2/9抑制劑BiPS進(jìn)一步檢測(cè)IL-1β增加胃腺癌細(xì)胞遷移和侵襲的可能機(jī)制是否涉及MMP2和MMP9；
　　5、應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)人胃腺癌組織樣本中磷酸化p38（p-p38）的表達(dá)及其表達(dá)強(qiáng)度與IL-1β、MMP2、MMP9表達(dá)強(qiáng)度之間的相關(guān)性；
　　6、應(yīng)用siRNA技術(shù)結(jié)合動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、RT-PCR和免疫組化技術(shù)檢測(cè)敲減p38再接受 IL-1β

5、刺激前后裸鼠胃癌肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)及裸鼠胃癌肺轉(zhuǎn)移組織中p38/p-p38、MMP2、MMP9 mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、IL-1β的刺激，可激活胃腺癌細(xì)胞AGS和MKN-45的p38蛋白激酶Western blot結(jié)果顯示：在IL-1β刺激后30min，兩株胃腺癌細(xì)胞AGS和MKN-45中的p38蛋白激酶均可被IL-1β激活，發(fā)生磷酸化；p38抑制劑SB202190預(yù)作用于細(xì)胞3h后再用I L-1β刺激，p3

6、8蛋白激酶磷酸化則被抑制，表明IL-1β激活p38蛋白激酶具有較強(qiáng)的特異性。
　　2、IL-1β激活p38蛋白激酶可增加胃腺癌細(xì)胞AGS和MKN-45遷移和侵襲能力Transwell測(cè)定結(jié)果表明：接受IL-1β刺激后，胃腺癌細(xì)胞AGS和MKN-45遷移和侵襲作用增強(qiáng)，與未接受刺激的細(xì)胞相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p﹤0.05)；轉(zhuǎn)染p38siRNA或用p38抑制劑SB202190預(yù)處理細(xì)胞，則胃腺癌細(xì)胞上述作用明顯減弱，表明IL-1

7、β增加胃腺癌細(xì)胞遷移和侵襲的作用是通過(guò)激活p38蛋白激酶。
　　3、IL-1β激活p38蛋白激酶通過(guò)上調(diào)MMP2和MMP9的表達(dá)增加胃腺癌細(xì)胞遷移和侵襲RT-PCR測(cè)定結(jié)果表明，IL-1β刺激后，胃腺癌AGS和MKN-45細(xì)胞中的MMP2和MMP9的mRNA表達(dá)增加，與未接受刺激的細(xì)胞相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p﹤0.05)；轉(zhuǎn)染p38siRNA和用p38抑制劑SB202190預(yù)處理的胃腺癌細(xì)胞接受IL-1β刺激后，MMP2和MM

8、P9的mRNA表達(dá)降低。上述結(jié)果初步表明IL-1β激活p38蛋白激酶增加胃腺癌細(xì)胞遷移和侵襲的機(jī)制涉及上調(diào)MMP2和MMP9。
　　4、Transwell測(cè)定結(jié)果表明：與siRNA陰性對(duì)照轉(zhuǎn)染組比較，MMP2 siRNA轉(zhuǎn)染組和MMP9 siRNA轉(zhuǎn)染組以及MMP2/MMP9抑制劑BiPS預(yù)處理組的胃腺癌細(xì)胞接受IL-1β刺激后遷移和侵襲能力明顯減弱，結(jié)果進(jìn)一步表明：IL-1β增加胃腺癌細(xì)胞遷移和侵襲的機(jī)制涉及上調(diào)MMP2和MMP

9、9。
　　5、免疫組化結(jié)果表明：在105例測(cè)定的胃腺癌樣本中，與配對(duì)非癌組織樣本比較，53例胃腺癌組織(50.48％)過(guò)表達(dá)磷酸化的 p38(p-p38)。p-p38的過(guò)表達(dá)與患者的年齡、性別、腫瘤大小、組織學(xué)類(lèi)型和腫瘤分化程度無(wú)關(guān)(p﹥0.05)，但與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤侵襲程度（至漿膜外）密切相關(guān)(p﹤0.05)。同時(shí)，p38的過(guò)表達(dá)與IL-1β, MMP2, MMP9的高表達(dá)具有顯著的相關(guān)性(r=0.72, p﹤0.01;r=0

10、.63, p﹤0.01;r=0.58, p﹤0.05）。
　　6、在裸鼠胃癌肺轉(zhuǎn)移形成實(shí)驗(yàn)中，與注射IL-1β+轉(zhuǎn)染 scrambled siRNA的MKN-45細(xì)胞組比較，注射PBS+轉(zhuǎn)染scrambled siRNA的MKN-45細(xì)胞組和注射IL-1β+轉(zhuǎn)染p38siRNA的MKN-45細(xì)胞組的轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)明顯少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；注射IL-1β+轉(zhuǎn)染scrambled siRNA組的p38（p-p38）、MMP