2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:闡明miR-26b過表達對脂肪細胞胰島素敏感性調(diào)控的分子機制。
  方法:
  1.高脂飲食喂養(yǎng)SD大鼠,建立飲食誘導肥胖(Diet-induced obesity,DIO)大鼠模型。高糖、高胰島素環(huán)境下誘導建立3T3-L1/HPA-v胰島素抵抗脂肪細胞模型;
  2.采用Real time PCR技術(shù),檢測動物及細胞模型中miR-26b的表達;
  3.胰島素(Insulin)、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤

2、(3-isobutyl-1-methyxanthine,MIX)、地塞米松(Dexamethasone,Dex)混合誘導劑誘導3T3-L1前體脂肪細胞分化為成熟脂肪細胞。胰島素、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤、地塞米松和羅格列酮(rosiglitazone)混合誘導劑誘導HPA-v前體脂肪細胞分化為成熟脂肪細胞;
  4.構(gòu)建miR-26b過表達慢病毒表達載體,感染人成熟脂肪細胞;48h后在熒光顯微鏡下,判斷病毒感染的效率;
 

3、 5.采用同位素標記葡萄糖進行糖攝取實驗,檢測胰島素刺激下脂肪細胞對葡萄糖攝取量的變化;
  6. Western Blot技術(shù),檢測 PI3K信號通路中關(guān)鍵蛋白分子胰島素受體(insulin recepor,IR)、胰島素受體底物(insulin receptor substrate,IRS)、AKT、p-AKT、葡萄糖轉(zhuǎn)運體-4(Glucose transporter type4,GLUT4)的表達及GLUT4膜蛋白(mGLU

4、T4)的含量;
  7.生物信息學預測miR-26b的靶標,采用熒光素酶報告實驗進行靶標驗證。
  結(jié)果:
  1.高脂飲食誘導后SD大鼠出現(xiàn)肥胖及代謝紊亂的特征,成功構(gòu)建DIO大鼠模型。DIO大鼠腸系膜脂肪組織中miR-26b的表達水平下降,且與應(yīng)用穩(wěn)態(tài)模型評估的胰島素抵抗指數(shù)(Homeostasis model assessment of insulin resistance, HOMA-IR)呈顯著負相關(guān);

5、>  2.胰島素抵抗細胞模型中miR-26b的表達水平顯著降低;
  3.miR-26b過表達促進脂肪細胞胰島素刺激下的葡萄糖攝取;
  4.miR-26b過表達可以顯著上調(diào)脂肪細胞胰島素刺激下的mGLUT4含量;
  5.miR-26b過表達可以顯著提高磷脂酰肌醇激酶3(phosphatidylinositol3-kinase, PI3K)胰島素信號通路中p-AKT水平;
  6.熒光素酶實驗的結(jié)果表明,第10

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