TLR4-MyD88-NF-κB信號通路在IBS樣功能性慢性內(nèi)臟痛中的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：采用行為學(xué)和電生理評價方法，探討新生期結(jié)直腸傷害性刺激(colonirritation，CI)對成年大鼠內(nèi)臟痛覺敏感性的影響，從而建立IBS樣功能性慢性內(nèi)臟痛模型;通過檢測IBS樣功能性慢性內(nèi)臟痛大鼠脊髓TLR4/MyD88/NF-κB信號通路的活化情況，探討其信號通路的活化在IBS樣功能性慢性內(nèi)臟痛形成中的作用，為臨床采取有效防治措施和開發(fā)治療藥物提供理論依據(jù)。
　　方法：本實驗采用新生期大鼠結(jié)直腸傷害性刺激建立腸易激綜合

2、癥(irritablebowel syndrome，IBS)樣功能性慢性內(nèi)臟痛動物模型，待其成年后8周（大概250g左右）應(yīng)用行為學(xué)腹壁撤退反射(abdominal withdrawal reflex，AWR)、痛閾值和腹外斜肌放電肌電圖（electromyography, EMG）檢測其內(nèi)臟敏感性，觀察其模型是否建立成功;進(jìn)一步應(yīng)用HE染色檢測大鼠結(jié)直腸組織形態(tài)學(xué)的變化情況;應(yīng)用RT-PCR檢測脊髓L2-S4段TLR4 mRNA的表達(dá)

3、情況;Western blot方法檢測脊髓L2-S4段toll樣受體4(toll-like receptor4，TLR4)/髓樣分化蛋白88(adapter proteinmyeloid differentiation factor88,MyD88)/核因子-kappaB(nuclear factor-kappa B，NF-κB)蛋白的表達(dá)情況;最后應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測TLR4/MyD88/NF-κB信號通路下游炎性細(xì)

4、胞因子IL-1β和TNF-α的釋放情況。
　　結(jié)果：(1)新生期反復(fù)結(jié)直腸擴(kuò)張刺激引起大鼠成年后AWR評分增加、痛閾值下降，腹外斜肌放電幅度增強(qiáng)，并且大鼠結(jié)直腸組織無明顯的炎癥反應(yīng)和組織損傷，從而成功建立了IBS樣功能性慢性內(nèi)臟痛動物模型;(2) IBS樣功能性慢性內(nèi)臟痛大鼠脊髓L2-S4段TLR4 mRNA的表達(dá)上調(diào)，TLR4蛋白表達(dá)增加，并且與TLR4mRNA的表達(dá)相一致;(3) IBS樣功能性慢性內(nèi)臟痛大鼠脊髓L2-S4段T

5、LR4下游信號蛋白MyD88、p-IκB和胞核NF-κB蛋白表達(dá)上調(diào);(4) IBS樣功能性慢性內(nèi)臟痛大鼠脊髓L2-S4段TLR4/MyD88/NF-κB信號通路下游炎性細(xì)胞因子IL-1β和TNF-α的釋放增加。
　　結(jié)論：新生SD大鼠給予反復(fù)短暫的結(jié)直腸擴(kuò)張刺激造成成年大鼠出現(xiàn)IBS樣功能性慢性內(nèi)臟痛后，可引起脊髓L2-S4段TLR4、MyD88和胞核NF-κB蛋白表達(dá)上調(diào)，炎性細(xì)胞因子IL-1β和TNF-α的釋放增加，說明TL