香連化濁解毒方對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠TLR4-MyD88-NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)通過觀察與研究香連化濁解毒方對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎（UC）大鼠模型一般情況、疾病活動(dòng)指數(shù)評(píng)分（DAI）、病理組織學(xué)及結(jié)腸組織中TLR4/MyD88/NF-κB信號(hào)通路相關(guān)分子（TLR4、MyD88、NF-κB）在mRNA的表達(dá)情況，探討TLR4/MyD88/NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在UC中的發(fā)病機(jī)制及本方通過干預(yù)該條通路治療UC的作用機(jī)制。將傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)與現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)技術(shù)相結(jié)合，為該方今后的臨床應(yīng)用、推廣提供了理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法

2、：將60只雄性、健康的Wistar大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)至200-250g/只，隨機(jī)分為6組（按隨機(jī)數(shù)字表法），分別為空白組（NG）、模型組（MG）、柳氮磺吡啶組（SASP組）、香連化濁解毒方高劑量組（HDG）、香連化濁解毒方中劑量組（MDG）、香連化濁解毒方低劑量組（LDG），每組各10只。除模型組外，其余各組大鼠均用2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）/乙醇法誘導(dǎo)制備UC大鼠模型。造模成功第4天開始，NG正常喂養(yǎng)，MG予生理鹽水灌胃，SAS

3、P予西藥柳氮磺吡啶混懸液灌胃，其余各香連化濁解毒方治療組給予相應(yīng)劑量的中藥湯劑灌胃。每日觀察、記錄每組大鼠的活動(dòng)量、飲食情況、大便性狀、精神狀態(tài)、被毛改變等，再記錄并記算大鼠的DAI評(píng)分。灌胃2w后，處死、解剖大鼠，觀察大鼠結(jié)腸黏膜的大體觀和組織病理學(xué)變化，并用實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄（RT-PCR）法測(cè)定結(jié)腸組織中TLR4、MyD88、NF-κB mRNA的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.一般情況與DAI評(píng)分。一般情況：NG大鼠反應(yīng)

4、靈敏，喜活動(dòng)、打斗較多，食欲旺盛，體重增長(zhǎng)正常，精神佳，被毛光滑亮澤，糞便呈顆粒狀。與NG大鼠比較，其余5組大鼠造模后逐漸活動(dòng)減少，食欲減退，體重下降，精神萎靡，被毛凌亂無光澤，糞便溏稀或可見粘液膿血。用藥后14d，HDG一般的情況與NG接近，MDG和SASP改善不及HDG，但此兩組比較改善情況無明顯差別，LDG雖然改善情況不及MDG和SASP，但優(yōu)于MG。
　　DAI評(píng)分：NG組評(píng)分為0，MG組（2.458±0.434）評(píng)分最高

5、，明顯高于HDG組（0.370±0.351）、MDG組（0.767±0.316）、LDG組（1.625±0.375）及SASP組（0.792±0.305），各組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HDG評(píng)分明顯低于MDG、LDG、SASP，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；LDG評(píng)分高于MDG和SASP，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MDG與SASP評(píng)分比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.黏膜結(jié)腸大體觀和病理學(xué)觀察。黏膜結(jié)腸大體觀：MG最差，HDG與NG相接近，MDG與SAS

6、P不及HDG，優(yōu)于LDG，但此兩組無明顯區(qū)別。
　　病理學(xué)觀察：NG為正常的大鼠結(jié)腸黏膜，MG急性潰瘍形成，伴滲出、壞死，黏膜全層彌漫性炎細(xì)胞浸潤(rùn)，腺體缺失，最嚴(yán)重。經(jīng)治療后HDG結(jié)腸黏膜修復(fù)與NG接近，未見潰瘍、糜爛等，充血、水腫不明顯，少許炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。MDG和SASP結(jié)腸黏膜修復(fù)接近，優(yōu)于LDG，但不及HDG。
　　3.TLR4、MyD88、NF-κB mRNA檢測(cè)結(jié)果比較。TLR4：與NG（0.219±0.038）比

7、較，MG（0.676±0.036）TLR4 mRNA的表達(dá)明顯上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與MG比較，各藥物治療組表達(dá)均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HDG（0.343±0.032） TLR4 mRNA的表達(dá)明顯低于MDG（0.427±0.030）、LDG（0.524±0.034）及SASP（0.419±0.024），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MDG與SASP比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；LDG組TLR4 mRNA的表達(dá)水平明顯高于MDG、SASP，差異

8、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　MyD88：與NG（0.245±0.030）比較，MG（0.627±0.021）MyD88 mRNA的表達(dá)明顯上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與MG比較，各藥物治療組MyD88 mRNA的表達(dá)均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HDG（0.387±0.040）MyD88 mRNA的表達(dá)明顯低于MDG（0.540±0.025）、LDG（0.542±0.036）及SASP（0.496±0.035），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MDG組、LDG

9、組MyD88 mRNA的表達(dá)明顯高于SASP組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MDG與LDG比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　NF-κB：與NG（0.244±0.015）比較，MG（0.624±0.017）NF-κB mRNA的表達(dá)明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與MG比較，各藥物治療組NF-κB mRNA的表達(dá)均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；HDG（0.336±0.019）NF-κB mRNA的表達(dá)明顯低于MDG（0.479±0.021）、LDG（0.5

10、16±0.012）及SASP（0.436±0.013），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；SASP組NF-κB mRNA的表達(dá)低于MDG組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MDG組NF-κB mRNA的表達(dá)低于LDG組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1.香連化濁解毒方能夠有效的改善UC大鼠腹瀉、粘液膿血便等一般情況，減輕結(jié)腸黏膜的病理損傷，抑制炎癥的浸潤(rùn)，促進(jìn)結(jié)腸黏膜的修復(fù)。在療效上，其與中藥劑量有相關(guān)的量-效關(guān)系。
　　2.香連化濁解毒方