HSF1對(duì)Dp71表達(dá)的調(diào)控研究.pdf

1、Dp71是抗肌萎縮蛋白(dystrophin)基因家族在諸多組織均有表達(dá)的一個(gè)具有多種功能的同源異構(gòu)體蛋白。近年來(lái)的一系列研究表明:該蛋白在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育，神經(jīng)系統(tǒng)功能的維護(hù)以及神經(jīng)細(xì)胞的黏附和增殖過(guò)程起著重要的作用。作為介導(dǎo)應(yīng)激反應(yīng)中熱休克蛋白(heat shock proteins，HSPs)產(chǎn)生的重要轉(zhuǎn)錄因子，熱休克因子1(heatshock factor1，HSF1)還能通過(guò)結(jié)合其他基因（如iNOS、Fas）啟動(dòng)子區(qū)的HSE影響

2、其mRNA和蛋白水平表達(dá)來(lái)發(fā)揮其他生物學(xué)功能。生物信息學(xué)軟件分析發(fā)現(xiàn)小鼠和人的Dp71啟動(dòng)子區(qū)含有一個(gè)熱休克元件(HSE)，表明Dp71的表達(dá)可能受到HSF1的調(diào)控。本課題主要是研究HSF1對(duì)Dp71基因的表達(dá)的影響，從而探討Dp71作為HSF1可能的下游調(diào)節(jié)產(chǎn)物，最終導(dǎo)致HSF1基因敲除小鼠產(chǎn)生一系列神經(jīng)系統(tǒng)癥狀。
　　本課題主要采取以下方法:1、取野生型小鼠和HSF1敲除小鼠的大腦、肺、肝臟、腎臟、脾臟等組織，提取蛋白和mRN

3、A做Western-blot和Real time RT-PCR，在整體動(dòng)物上檢測(cè)HSF1敲除對(duì)DP71在非肌肉組織中表達(dá)水平的影響;2、人肺癌A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染HSF1真核表達(dá)質(zhì)粒和干擾質(zhì)粒，Western-blot和Real time RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞中HSF1表達(dá)的上調(diào)或下調(diào)對(duì)DP71的mRNA和蛋白表達(dá)水平的影響;3、EMSA和雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)從分子水平驗(yàn)證HSF1與Dp71基因啟動(dòng)子區(qū)HSE的結(jié)合。
　　結(jié)果顯示:

4、(1)和野生型小鼠相比，HSF1敲除小鼠非肌肉組織中Dp71的mRNA和蛋白表達(dá)水平下降，其中腦組織和肺組織中表達(dá)有差異，其差值具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;(2) A549細(xì)胞中轉(zhuǎn)染HSF1真核表達(dá)質(zhì)粒和干擾質(zhì)粒明顯升高和降低A549細(xì)胞Dp71的mRNA和蛋白表達(dá)水平(3) EMSA和熒光素酶報(bào)告基因證實(shí)HSF1能與Dp71基因啟動(dòng)子區(qū)的HSE直接結(jié)合。以上結(jié)果表明:整體動(dòng)物中HSF1缺失可使Dp71在非肌肉組織中表達(dá)降低;HSF1過(guò)表達(dá)和表達(dá)抑