熱休克預處理及HSF1對LPS所致巨噬細胞遷移及黏附的影響研究.pdf

1、細胞遷移發(fā)生于胚胎形成、機體免疫、急慢性炎癥及腫瘤等多種生理及病理過程中，是炎癥過程中必不可少的環(huán)節(jié)之一。炎癥發(fā)生時，白細胞可以通過血管壁滲出到血管外并在局部組織中聚集，這個過程稱為白細胞浸潤。單核/巨噬細胞通常是到達浸潤部位的主要白細胞之一。白細胞浸潤是一個極為復雜的連續(xù)過程，主要由白細胞的三個生物學特性決定：黏附作用、趨化作用、變形作用。其中趨化作用是白細胞參與炎癥反應的重要前驅(qū)反應。 熱休克反應（HSR）是機體最重要的保護

2、機制之一。熱休克因子1（HSF1）通過誘導熱休克蛋白（HSPs）的表達，在細胞內(nèi)源性保護中發(fā)揮重要作用。近年國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)，HSF1及HSPs也參與了對小鼠胚胎成纖維細胞及人胚胎腎細胞遷移的調(diào)節(jié)過程。這為我們研究HSR及HSF1調(diào)控細胞遷移提供了重要信息。然而，HSR是否可以調(diào)控炎癥中重要細胞之一的巨噬細胞的遷移？HSF1是否及如何參與該調(diào)控過程？目前尚無相關研究。 為探討熱休克預處理對脂多糖（LPS）所致巨噬細胞遷移及黏附的影

3、響，本研究首先采用腹腔注射大腸桿菌LPS的小鼠模型，通過加熱使小鼠肛溫升至42℃并維持15min制備熱休克預處理模型，采用支氣管肺泡灌洗觀察熱休克預處理對LPS所致小鼠肺泡白細胞滲出的影響；并采用LPS體外刺激的小鼠腹腔巨噬細胞及RAW264.7巨噬細胞株為模型，應用趨化實驗、劃痕愈合實驗及黏附實驗觀察熱休克預處理（42℃，1h）對LPS所致巨噬細胞遷移的影響；為探討HSF1在熱休克預處理對LPS所致巨噬細胞遷移的影響中是否發(fā)揮作用，采

4、用HSF1基因敲除小鼠制備內(nèi)毒素血癥模型，應用免疫組化技術觀察HSF1基因敲除小鼠肺、肝組織形態(tài)學變化及巨噬細胞浸潤情況；采用HSF1敲除小鼠腹腔巨噬細胞，應用趨化實驗觀察HSF1敲除對LPS所致巨噬細胞遷移的影響；并采用HSF1過表達的RAW264.7巨噬細胞株，應用趨化實驗觀察HSF1過表達對LPS所致巨噬細胞遷移的影響。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)： （1）.LPS（12mg/kg，2h）腹腔注射促進小鼠血清中TNF-α、IL-6、

5、IL-10的釋放；LPS（600ng/ml，2h）促進RAW264.7巨噬細胞株TNF-α的釋放。 （2）.腹腔注射LPS（12mg/kg，48h）導致小鼠肺泡灌洗液中白細胞總數(shù)及巨噬細胞數(shù)均明顯增加，熱休克預處理抑制了LPS所致小鼠白細胞及巨噬細胞向肺泡的遷移；采用體外趨化實驗檢測LPS（600ng/ml，24h）刺激RAW264.7巨噬細胞株及小鼠腹腔巨噬細胞，發(fā)現(xiàn)兩種細胞的遷移均明顯增加，而熱休克預處理能抑制LPS所致的巨

6、噬細胞遷移；LPS處理（600ng/ml，24h）促進兩種巨噬細胞向劃痕部位的遷移而熱休克預處理可抑制LPS對巨噬細胞遷移的促進作用；LPS處理（600ng/ml，1h）可使上述兩種巨噬細胞與細胞外基質(zhì)的黏附增加，而熱休克預處理可抑制LPS對巨噬細胞黏附的促進作用。 （3）.HSF1基因敲除廢除了熱休克預處理對LPS所致的小鼠肺、肝組織巨噬細胞浸潤及組織損傷的保護作用，也廢除了熱休克預處理對LPS所致小鼠腹腔巨噬細胞遷移的抑制作