中藥單體MD3對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞分化發(fā)育和功能的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、本課題組與之合作，從中篩選出多種對(duì)于免疫功能具有調(diào)控作用的單體成分。其中，一種對(duì)于樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cells，DCs)的功能具有調(diào)控作用的單體MD3引起了我們的興趣。樹(shù)突狀細(xì)胞是體內(nèi)功能最強(qiáng)大的抗原提呈細(xì)胞，在免疫應(yīng)答與免疫耐受中發(fā)揮著重要的作用。近年來(lái)，越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)免疫抑制性藥物對(duì)免疫功能的抑制作用和其對(duì)于DCs功能的調(diào)節(jié)有關(guān)。本課題重點(diǎn)分析了中藥單體MD3對(duì)DCs發(fā)育分化和功能的影響，并初步分析了其作用的機(jī)制。

2、 一、中藥單體MD3對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞分化發(fā)育的影響 為了分析MD3對(duì)DCs發(fā)育分化的影響，我們首先應(yīng)用不同濃度(0、0.4、4、20、40、80μmol/ml)的MD3處理DCs并檢測(cè)了其分化發(fā)育的情況。正常培養(yǎng)DCs3天換液時(shí)，加入不同濃度的藥物MD3，繼續(xù)作用72小時(shí)候，進(jìn)行一系列觀察和檢測(cè)。首先，進(jìn)行形態(tài)學(xué)方面的觀察，在顯微鏡下觀察可見(jiàn)，在0-0.4μmol/m的濃度范圍之內(nèi)，藥物MD3并不顯著影響DCs的增殖，在低倍

3、鏡下觀察，DCs的集落的數(shù)量、形態(tài)、大小沒(méi)有顯著的差異。而在20μmol/ml的濃度時(shí)，DCs的集落形態(tài)明顯變小，數(shù)量上差異特別明顯。在40-80μmol/ml的濃度時(shí)，幾乎看不到集落的形成。收集經(jīng)過(guò)同樣處理的DCs，進(jìn)行了細(xì)胞凋亡的研究，在以Annexin-v、7-AAD和Rho123標(biāo)記后，結(jié)果顯示，藥物MD3在藥理濃度(0-0.4μmo/ml)范圍內(nèi)，并不顯著抑制DCs的增殖。以小鼠DCs的典型標(biāo)志CD11c標(biāo)記小鼠，并以7-AA

4、D去除死細(xì)胞，來(lái)觀察藥物處理的DCs的純度，結(jié)果顯示，在藥理濃度范圍內(nèi)，MD3并不影響DCs的分化，僅在較高濃度和高濃度時(shí)，DCs的分化能力降低。同時(shí)，我們以4μmo/ml MD3處理正常培養(yǎng)3天的DCs，繼續(xù)培養(yǎng)3天后，觀察DCs表型的變化，結(jié)果顯示，藥物處理后的DCs的表型并沒(méi)有變化，這也提示MD3并不影響DCs的分化發(fā)育。我們還觀察了不同時(shí)間點(diǎn)加入藥物后，DCs的增殖況，結(jié)果顯示，不同時(shí)間處理的DCs也沒(méi)有顯著的差異。 總

5、之，MD3對(duì)DCs的分化發(fā)育并沒(méi)有顯著的影響。但超過(guò)藥理濃度的MD3對(duì)于DCs具有明顯的促凋亡作用，表明對(duì)于該單體的結(jié)構(gòu)可能還需要進(jìn)一步改造以減輕其毒副作用。 二、中藥單體MD3對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞功能的影響及其作用機(jī)制 DCs的主要功能包括吞噬功能、細(xì)胞因子的分泌功能、遷移能力以及抗原處理和提呈功能等。在本部分研究中，我們就MD3對(duì)于DCs功能的調(diào)節(jié)作用展開(kāi)了研究。首先，觀察了MD3對(duì)DCs吞噬能力的影響，結(jié)果顯示，MD3對(duì)

6、未成熟和成熟DCs的吞噬能力都沒(méi)有顯著的影響。我們也檢測(cè)了MD3處理后經(jīng)I，PS刺激的成熟DCs的表型，結(jié)果顯示沒(méi)有明顯的變化。在細(xì)胞因子的分泌方面，我們觀察到MD3處理后的DCs的IL-10分泌增高，TNF-α和IL-12P70的表達(dá)沒(méi)有明顯的變化。DCs的遷移能力對(duì)于體內(nèi)DCs的生物學(xué)功能的發(fā)揮也有重要的作用。在體外的趨化實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)MD3可以抑制MIp-1α對(duì)未成熟DCs的趨化，而對(duì)MIp-3β對(duì)成熟的DCs的趨化能力沒(méi)有影響

7、。我們也對(duì)其機(jī)制進(jìn)行了一些研究，結(jié)果顯示，其顯著降低未成熟DCs表面的趨化性受體的表達(dá)，而在成熟DCs趨化性受體CCR7的表達(dá)沒(méi)有顯著影響。此外，我們也觀察了MD3處理的經(jīng)LPS刺激的DCs誘導(dǎo)同種異體T淋巴細(xì)胞和特異性T淋巴細(xì)胞增殖的能力，結(jié)果顯示，MD3對(duì)此均具有一定的抑制作用。 綜上所述，本研究結(jié)果顯示中藥單體MD3對(duì)DCs分化發(fā)育沒(méi)有顯著影響，但是可以顯著影響未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞的趨化并促進(jìn)成熟DCs分泌IL-10。這兩方面