HBcAg和HBeAg對(duì)小鼠骨髓源性樹(shù)突狀細(xì)胞功能的影響.pdf

1、目的：
　　1.分離小鼠骨髓細(xì)胞，體外誘導(dǎo)培養(yǎng)為樹(shù)突狀細(xì)胞(DCs)。
　　2.研究體外負(fù)載HBcAg和HBeAg對(duì)小鼠骨髓源性肝DCs功能的影響，分析其可能機(jī)制。
　　方法：
　　1.分離C57BL/6小鼠骨髓細(xì)胞，用rmGM-CSF和rmIL-4體外誘導(dǎo)為樹(shù)突狀細(xì)胞(DCs)。
　　2.利用磁珠分選系統(tǒng)純化DCs，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)純化DCs純度。
　　3.按照干預(yù)條件，將純化DCs分為對(duì)照組、HBc

2、Ag組和HBeAg組。CCK-8法檢測(cè)DCs在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)中刺激T淋巴細(xì)胞增殖的能力，酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)DCs培養(yǎng)上清中IL-12、IL-10和IDO的分泌水平，蛋白免疫印跡(Western blot)檢測(cè)DCs中Akt的磷酸化水平。同時(shí)，設(shè)置LY294002組為陽(yáng)性對(duì)照探討細(xì)胞因子分泌的可能調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　1.成功分離獲得C57BL/6小鼠骨髓細(xì)胞，體外用rmGM-CSF和rmIL-4誘

3、導(dǎo)為小鼠骨髓源性DCs，可見(jiàn)貼壁細(xì)胞逐漸懸浮和半貼壁，并呈細(xì)胞積聚現(xiàn)象，形態(tài)不規(guī)則呈樹(shù)突樣突起。收集第6天時(shí)的懸浮和半貼壁細(xì)胞，經(jīng)CD11c+磁珠分選系統(tǒng)純化后，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DCs純度達(dá)90％以上，滿(mǎn)足進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)要求。
　　2.HBcAg組上清液中IL-12水平以及DCs刺激淋巴細(xì)胞增殖能力較對(duì)照組明顯升高（P＜0.01）。HBeAg組上清液中IL-12水平以及DCs刺激淋巴細(xì)胞增殖能力較對(duì)照組明顯降低（P＜0.05），而IL-

4、10和吲哚胺2，3-雙加氧化酶(IDO)的水平較對(duì)照組明顯升高（P＜0.01）。HBeAg組Akt的磷酸化水平較對(duì)照組明顯升高(P＜0.05)。LY294002組Akt的磷酸化水平較HBeAg組明顯降低（P＜0.05），并且上清液中IL-12水平較HBeAg組明顯升高(P＜0.01)，IL-10和IDO的分泌水平較HBeAg組明顯降低(P＜0.01)。
　　結(jié)論：
　　1.HBcA能夠促進(jìn)小鼠骨髓源性DCs分泌IL-12，增

5、強(qiáng)其刺激T淋巴細(xì)胞增殖能力。
　　2.HBeAg可以明顯抑制小鼠骨髓源性DCs的Th1型細(xì)胞因子(IL-12)的產(chǎn)生，促進(jìn)Th2型細(xì)胞因子(IL-10)的分泌，導(dǎo)致Th1/Th2型細(xì)胞因子失衡，并減弱其刺激T淋巴細(xì)胞增殖能力。
　　3.HBeAg刺激的小鼠骨髓源性DCs分泌高水平的IDO。該DCs可能具備一定調(diào)節(jié)性DCs的免疫調(diào)節(jié)功能。
　　4.HBeAg可能通過(guò)影響DCs中的PI3K-Akt信號(hào)通路調(diào)節(jié)DCs細(xì)胞因子