甲-戊型肝炎重組抗原的表達(dá)，純化及與傳統(tǒng)甲肝疫苗免疫原性的比較.pdf

1、甲型肝炎病毒（Hepatitis A Virus，HAV）和戊型肝炎病毒（Hepatitis E Virus HEv）是腸道傳播的兩種肝炎病毒，兩種病毒從分子病毒學(xué)到流行病學(xué)及其引起的臨床癥狀都很相似，如都是無(wú)包膜，單股正鏈RNA病毒，主要經(jīng)糞-口途徑傳播：依靠實(shí)驗(yàn)室檢查進(jìn)行鑒別。HAV是腸道傳染疾病，主要感染兒童，但隨著年齡增加，一旦感染，肝炎癥狀會(huì)更嚴(yán)重。戊型肝炎也是一種腸道傳染疾病，在一些國(guó)家，急性肝損害和散發(fā)急性肝炎病例中50％

2、以上由戊肝引起，在孕婦、原有慢性肝病、老年人等人群中病死率較高，目前報(bào)道急性戊肝導(dǎo)致孕婦死亡率可高達(dá)25％。我國(guó)是戊肝主要流行區(qū)之一，曾在新疆發(fā)生大規(guī)模戊肝暴發(fā)流行，引起約12萬(wàn)人發(fā)病，死亡人數(shù)近千人。甲型肝炎已有疫苗進(jìn)行預(yù)防而戊型肝炎目前還沒有疫苗，由于兩種病毒有著相似的特性，因此研究聯(lián)合疫苗具有可能性。
　　 本論文主要研究了HAV Vp1和HEV ORF2編碼的抗原片斷形成嵌合類病毒顆粒的免疫原性。將HAV Vp1（aa2

3、4～171）與HEV ORF2（aa431～6l5）N端相連，形成重組抗原AEAg342或與ORF2 C端相連，形成EAAg342重組抗原。將上述兩種嵌合抗原基因插入表達(dá)載體pBV220構(gòu)建成表達(dá)質(zhì)粒pBV220-AEAg342和pBV220-EAAg342，然后用質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21進(jìn)行表達(dá)。結(jié)果表明pBV220-AEAg342和pBV220-EAAg342在BL21中獲得了高效表達(dá)，表達(dá)的重組蛋白相對(duì)分子質(zhì)量約為36KD。電鏡觀

4、察只有重組蛋白EAAg342能形成直徑10～20nm的類病毒顆粒（VLP顆粒）。Western blot顯示兩種重組抗原均能分別與甲型肝炎及戊型肝炎患者陽(yáng)性血清發(fā)生特異性反應(yīng)。
　　 隨后對(duì)重組蛋白AEAg342和EAAg342誘導(dǎo)的特異體液免疫反應(yīng)以及其與傳統(tǒng)甲肝疫苗免疫原性進(jìn)行了比較。四組昆明鼠，每組6只，分別注射兩種重組抗原10μg+弗氏佐劑和傳統(tǒng)甲肝滅活/減毒活疫苗100μl，3周及5周后分別再加強(qiáng)免疫一次，同時(shí)設(shè)一空白

5、對(duì)照組。于第一次免疫后2，4，6，8，10和12周采血測(cè)特異性抗HAV和HEV IgG滴度。結(jié)果顯示EAAg342誘導(dǎo)的抗HEV抗體滴度在第8周達(dá)到了1:1000000，顯著高于AEAg342組。在抗HAV特異性抗體方面，甲肝滅活疫苗活性最強(qiáng)，其次為甲肝減毒活疫苗，EAAg342組，AEAg342組活性最弱。
　　 本研究的結(jié)果證明了使用原核系統(tǒng)表達(dá)的甲/戊肝重組抗原能夠高效表達(dá)，嵌合類病毒顆粒（VLP）EAAg342可以誘導(dǎo)良