骨髓間質(zhì)干細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用及其對(duì)膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎影響的研究.pdf

1、目的：研究骨髓間質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cell，MSC)的免疫調(diào)節(jié)作用，觀察骨髓MSC對(duì)膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(Collagen-induced arthritis，CIA)的影響，探討骨髓MSC用于膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎治療的可能機(jī)制，為免疫相關(guān)性疾病的免疫干預(yù)研究提供新的思路。
　　 方法：
　　 (1)從胚胎及Wistar大鼠股骨中分離培養(yǎng)MSC，經(jīng)克隆化分選出形態(tài)均一的細(xì)胞，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其表面標(biāo)志以

2、鑒定其純度。
　　 (2)采用3H-TdR法、RT-PCR和Real-time PCR檢測(cè)經(jīng)MSC處理的人外周血單個(gè)核細(xì)胞的增殖及其細(xì)胞因子表達(dá)，以未經(jīng)MSC處理的同一人外周血單個(gè)核細(xì)胞標(biāo)本作對(duì)照。
　　 (3)應(yīng)用3H-TdR法、Real-time PCR以及Western-blot檢測(cè)MSC對(duì)小鼠樹突狀細(xì)胞系細(xì)胞(D2SC)的增殖及其分泌IP-10(IFNγ-inducibleprotein10，也稱CXCL10)的

3、作用。
　　 (4)建立膠原誘導(dǎo)的DBA/1小鼠類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型，將2×106的MSCs經(jīng)尾靜脈注射到CIA小鼠體內(nèi)，采用測(cè)量關(guān)節(jié)腫脹程度、HE染色、ELISA、Real-time PCR以及Western-blot等方法觀察MSC的干預(yù)結(jié)果。
　　 (5)利用Real-time PCR方法觀察經(jīng)MSC干預(yù)后的CIA模型鼠TLR8和TLR9的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 (1)MSC對(duì)ConA刺激的單

4、個(gè)核細(xì)胞增殖的影響與MSC和單個(gè)核細(xì)胞的比值有關(guān)，當(dāng)比值較大時(shí)MSC對(duì)ConA刺激的單個(gè)核細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用，但是比值較小時(shí)反而會(huì)促進(jìn)其增殖。MSC對(duì)單個(gè)核細(xì)胞分泌TGF-β1無顯著性影響，MSC對(duì)ConA刺激的單個(gè)核細(xì)胞分泌IL-6也無顯著性影響，卻促進(jìn)單個(gè)核細(xì)胞分泌IL-10，減少單個(gè)核細(xì)胞分泌IL-8。
　　 (2)MSC促進(jìn)了D2SC的增殖并提高了D2SC的IP-10表達(dá)水平，提示MSC可通過對(duì)抗原提呈細(xì)胞的作用參

5、與免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)。
　　 (3)建立了膠原誘導(dǎo)的DBA/1小鼠類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型(CIA)。應(yīng)用MSC干預(yù)后發(fā)現(xiàn)，模型鼠關(guān)節(jié)處的紅腫消失；關(guān)節(jié)局部浸潤的炎癥細(xì)胞減少；外周血TNF-α的分泌水平降低；IP-10、CXCR3和IL-10表達(dá)水平增加；而IL-1β、IL-17A、TLR8以及TLR9的表達(dá)水平的降低。
　　 結(jié)論：
　　 (1)MSC具有下調(diào)免疫應(yīng)答或改變免疫細(xì)胞亞群平衡的作用。
　　 (2)M

6、SC對(duì)免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用不僅反映在其對(duì)單個(gè)核細(xì)胞的作用，還體現(xiàn)在其對(duì)抗原提呈細(xì)胞的影響。MSC可通過促進(jìn)D2SC的增殖和增強(qiáng)D2SC分泌IP-10的能力發(fā)揮免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)作用。
　　 (3)MSC可緩解膠原誘導(dǎo)的DBA/1小鼠類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的癥狀，可能機(jī)制與下列因素相關(guān)：①M(fèi)SC明顯降低了參與炎癥的細(xì)胞因子IL-1β、IL-17A和TNF-α的表達(dá)。②MSC促進(jìn)單個(gè)核細(xì)胞分泌IL-10，而IL-10可通過糾正Th1細(xì)胞的極化狀態(tài)，

7、促進(jìn)Th1/Th2細(xì)胞平衡的恢復(fù)，有助于免疫炎癥的控制。③MSC干預(yù)后，模型鼠機(jī)體的TLR8、TLR9表達(dá)水平降低，表明MSC可能通過TLR信號(hào)的干預(yù)而改善關(guān)節(jié)損傷癥狀。
　　 總之，MSC通過影響單個(gè)核細(xì)胞增殖和促進(jìn)D2SC增殖與分泌IP-10調(diào)節(jié)免疫功能；MSC改善膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎癥狀，其可能機(jī)制與降低細(xì)胞炎癥因子表達(dá)，促進(jìn)Th1/Th2細(xì)胞平衡恢復(fù)以及下調(diào)TLR(TLR8，TLR9)信號(hào)有關(guān)。這些研究將為MSC治療免疫相關(guān)