阿霉素脂質(zhì)納米粒的制備及細胞學(xué)研究.pdf

1、抗癌藥物阿霉素是臨床上普遍使用的廣譜抗腫瘤藥物。但是由于藥物的反復(fù)使用，腫瘤細胞對藥物產(chǎn)生了耐藥性，這也是臨床上腫瘤化學(xué)治療失敗的主要原因之一。尋找高效和低毒，并能夠逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞多藥耐藥的藥物載體已成為腫瘤治療亟待解決的首要問題之一。針對抗腫瘤藥物的這個問題，本課題設(shè)計了一種核殼型的脂質(zhì)納米粒，并考察了載阿霉素制劑對腫瘤細胞的殺傷作用。在此基礎(chǔ)上考察了脂質(zhì)納米粒的耐藥機制，為探索更多新型高效的納米載體提供了參考。
　　 本論文首

2、先將阿霉素與PLGA接枝制備了阿霉素-PLGA接枝共聚物，并應(yīng)用1H-NMR和GPC進行表征。以合成的阿霉素-PLGA接枝共聚物為原料，采用乳化-溶劑揮發(fā)法制備阿霉素-PLGA納米粒，并對其形態(tài)、粒徑、電位、釋藥行為進行了考察。
　　 接著采用薄膜分散法制備了外層磷脂層，利用制備的阿霉素-PLGA納米粒為核心，孵育包裹DPPC脂質(zhì)層制備核殼型脂質(zhì)納米粒。并對zeta電位、粒徑、形態(tài)進行表征，結(jié)果顯示脂質(zhì)納米粒的形態(tài)為球形，粒徑約

3、為250nm，與DLS粒徑測試結(jié)果相一致，并且從圖中可以清晰的看到納米粒外層包裹的脂質(zhì)層。Zeta電位結(jié)果顯示脂質(zhì)納米粒的電位在-10～5mV，并且分布均勻。
　　 繼而用MTT法考察空白載體材料的生物相容性，結(jié)果表明制備的脂質(zhì)納米?；緹o細胞毒性，材料具有良好的生物相容性。同時考察阿霉素脂質(zhì)納米粒對四種細胞株MCF-7、MCF-7/ADR、HL-60、HL-60/ADR的細胞毒性，與游離藥物阿霉素相比，載藥脂質(zhì)納米粒對耐藥株細

4、胞毒性明顯提高，說明載藥脂質(zhì)納米粒在一定程度上可以逆轉(zhuǎn)耐藥株細胞的多藥耐藥性。使用激光共聚焦顯微鏡觀察了載藥脂質(zhì)納米粒的入胞及入核情況，圖片表明脂質(zhì)納米粒能夠?qū)乃幬飻y帶進入細胞核，再次驗證了脂質(zhì)納米粒對細胞的抑制作用。使用流式細胞術(shù)考察藥物在細胞內(nèi)的蓄積情況，數(shù)據(jù)顯示隨著時間的推移脂質(zhì)納米?？梢栽谀退幖毎麅?nèi)蓄積。
　　 小分子藥物主要通過內(nèi)吞途徑進入細胞，但在內(nèi)吞過程中，藥物一般會與內(nèi)吞小體結(jié)合并被溶酶體內(nèi)的水解酶降解，使

5、藥物不能很好地發(fā)揮治療效果，這個過程在很大程度上限制了納米制劑在臨床中的應(yīng)用。鈣黃綠素是一種小分子水溶性的熒光探針，文獻報道游離的鈣黃綠素不能進入細胞，因而常作為納米制劑的藥物模型，用來評價藥物在細胞內(nèi)的攝取情況。本課題利用鈣黃綠素作為模型藥物，制備鈣黃綠素脂質(zhì)納米粒，并初步考察其在四種細胞的攝取途徑以及在腫瘤細胞內(nèi)的攝取機制。結(jié)果顯示，鈣黃綠素脂質(zhì)納米粒能夠逃避溶酶體的消化進入細胞核，從機制證明了脂質(zhì)納米粒對包載藥物的運載作用。為了研