血管生成抑制劑Vasostatin蛋白的制備和抗腫瘤研究.pdf

1、抗血管生成治療是腫瘤綜合治療方案中的重要組成部分.Vasostatin是Sandra E.pike于1998年發(fā)現(xiàn)的Calreticulin蛋白N端1-180個(gè)氨基酸結(jié)構(gòu)片段,在人肝臟和胰腺等組織廣泛分布,可抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、血管生成和腫瘤生長(zhǎng),但Vasostatin這一抗血管生成的作用機(jī)制仍不清楚. 以本室已構(gòu)建和鑒定的Vasostatin菌株和包涵體為研究材料,通過(guò)親和層析純化方案制備純度大于95﹪樣品,對(duì)純化蛋白進(jìn)行質(zhì)量

2、評(píng)價(jià),包括分子量、純度、等電點(diǎn)等理化指標(biāo)符合本研究要求.細(xì)胞學(xué)水平:通過(guò)Vasostatin抑制血管細(xì)胞遷移和生長(zhǎng)抑制的比較研究,建立人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HHEC)遷移抑制和人皮膚微血管內(nèi)皮細(xì)胞系(HM2)增殖抑制試驗(yàn)方法,證實(shí)Vasostatin具有抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移和增殖的生物學(xué)活性.動(dòng)物水平:H22鼠源肝癌小白鼠移植瘤生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)證實(shí)Vasostatin蛋白在160μg/只·天(相當(dāng)與8mg/kg·day)劑量下抑瘤率為61.7﹪

3、；病理學(xué)檢測(cè)腫瘤內(nèi)外血管密度遠(yuǎn)低于陰性對(duì)照組腫瘤內(nèi)外血管密度,未見(jiàn)其他臟器的毒性相關(guān)的病理組織學(xué)變化,說(shuō)明Vasostatin蛋白能夠抑制血管生成從而抑制腫瘤的生長(zhǎng)；SMMC7721人源肝癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)抑制試驗(yàn),Vasostatin蛋白在1.5mg/只·天(相當(dāng)于75mg/kg·day)劑量下抑瘤率為46.2﹪,與陰性對(duì)照組有顯著性差別. 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)Vasostatin蛋白明顯的抑制腫瘤血管生成進(jìn)而抑制腫瘤生長(zhǎng)的情況下,通過(guò)

4、第3代酵母雙雜交方法進(jìn)一步研究作用機(jī)制.通過(guò)對(duì)人內(nèi)皮細(xì)胞eDNA文庫(kù)的篩選,共得到3個(gè)陽(yáng)性克隆,分別為層粘連蛋白α5和整合素alphaV的片段,分屬整合素與層粘連蛋白家族,與細(xì)胞遷移等密切相關(guān)<'[6-7]>,提示與vasostatin的作用機(jī)制有關(guān).Vasostatin與整合素和層粘連蛋白結(jié)合,影響了VEGF和bFGF的信號(hào)通路,從而影響腫瘤內(nèi)血管的生成,抑制腫瘤生長(zhǎng).在此基礎(chǔ)上,通過(guò)結(jié)合力驗(yàn)證層粘連蛋白能夠與Vasostatin蛋白