桔梗皂苷的抗氧化及脂質(zhì)調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、機體脂質(zhì)異常是本世紀常見又多發(fā)的癥狀，常引發(fā)動脈粥樣硬化、冠心病等心腦血管疾病。動脈粥樣硬化是由于體內(nèi)過大的氧化壓力造成的慢性炎癥反應(yīng)，氧化型低密度脂蛋白(OxLDL)會加速動脈硬化病變，其原因可能是直接對內(nèi)皮細胞一氧化氮(NO)合成的細胞毒活性、內(nèi)皮細胞通過選擇性的表達細胞表面粘附分子如動脈細胞粘附分子和細胞粘附分子而結(jié)合單核細胞使其轉(zhuǎn)化，及平滑肌細胞的增殖與遷移等。臨床常用藥物以西藥為主，副作用較大，所以尋求與開發(fā)降血脂與抗動脈硬化

2、的天然藥物以及抑制低密度脂蛋白氧化和損傷的天然藥物的研究非常必要。
　　桔梗Platycodon grandiflorum A.DC.，為桔?？?Campanulaceae)桔梗屬(Platycodon)植物，是中國及其他亞洲國家重要的藥食兩用資源，廣泛用于食品及治療很多慢性炎癥，如支氣管炎、哮喘及肺結(jié)核等。化學(xué)分析結(jié)果顯示三萜皂苷為其主要活性成分。早期的研究揭示了諸多三萜皂苷的提取與結(jié)構(gòu)分析，如桔梗皂苷A、C、D等為桔梗三萜皂苷

3、的重要活性成分。桔梗皂苷被發(fā)現(xiàn)具有很多的生物學(xué)活性，如免疫調(diào)節(jié)作用、抗炎作用、神經(jīng)保護作用、誘導(dǎo)角質(zhì)細胞凋亡、鎮(zhèn)痛作用、抗白血病作用和抗癌作用等。特別是其調(diào)脂方面的研究，提示桔?？赡芫哂锌寡趸瘬p傷或?qū)用}粥樣硬化的干預(yù)作用。
　　本課題以魯山地區(qū)采集的桔梗為材料，研究其主要活性成分桔?？傇碥?PGTS)與桔梗皂苷D(PD)的提取與鑒定、體外抗氧化作用，如清除自由基及還原力的研究；PGTS對高脂乳劑誘導(dǎo)的大鼠血清及肝臟脂質(zhì)水平的影響

4、，如總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、載脂蛋白AI(ApoAI)、載脂蛋白B(ApoB)、動脈硬化指數(shù)TC/HDL-C和AI等；對體內(nèi)氧化狀態(tài)的影響，如對血清和肝總抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的作用；對與膽固醇代謝相關(guān)的低密度脂蛋白受體(LDL-r)蛋白表達、3-羥基-3-甲基-輔酶A還原酶(HMG-CoM-r)蛋白表達、膽固醇

5、7α-羥化酶1(CYP7A1)基因表達的影響及對糞便中膽汁酸含量的影響等；同時分離PD，研究其對OxLDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細胞的MDA、NO分泌、動脈細胞粘附分子(VCAM-1)和細胞粘附分子(ICAM-1)表達、單核(THP-l)-內(nèi)皮細胞(HUVEC-12)粘附狀態(tài)的影響等。從而確定桔梗總皂苷的抗氧化及脂質(zhì)調(diào)節(jié)作用的機理。
　　實驗選用大孔吸附樹脂作為提取桔?？傇碥盏牟牧?，與超聲波輔助水提方法進行對比，優(yōu)化實驗條件，建立制備桔?？傇?/p>

6、苷的方法。在此基礎(chǔ)上利用硅膠柱，進一步對桔?？傇碥者M行分離，充分利用不同部位極性的差別，獲得PD。
　　結(jié)合文獻資料，配制高效高脂乳劑，刺激SD大鼠，2周建立高脂乳劑大鼠模型，分別以低(30mg/kg B。W。/d)、中(50mg/ kg B。W。/d)、高(100mg/ kg B。W。/d)三個濃度桔?？傇碥蘸?5mg/ kg B。W。/d辛伐他汀陽性藥物灌胃處理，連續(xù)4周后。禁食過夜(12h)，取血清測其TC、TG、HDL-C

7、、LDL-C、ApoAI、ApoB、T-AOC、SOD、MDA值；取肝臟制勻漿測其TC、TG、T-AOC、SOD、MDA值；取肝臟組織做組織冰凍切片，油紅-O染色，觀察脂質(zhì)化狀態(tài)及氧化損傷；免疫組化法檢測肝臟 LDL-r蛋白表達；免疫印跡法檢測肝膽固醇合成限速酶HMG-CoM-r蛋白的表達；聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)技術(shù)檢測膽固醇代謝酶CYP7A1基因的表達；同時采集大鼠糞便，化學(xué)法檢測糞便中膽汁酸的水平。
　　利用OxLDL誘導(dǎo)人

8、臍靜脈內(nèi)皮細胞，建立其氧化模型，分別以0.10 mg/mL、0.15 mg/mL、0.25 mg/mL PD處理后，測定培養(yǎng)液NO和MDA水平；實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)(qRT-PCR)研究細胞內(nèi)動脈細胞粘附分子和細胞粘附分子的表達；同時進行單核細胞與內(nèi)皮細胞的粘附實驗，以期探討PD對氧化型低密度脂蛋白誘導(dǎo)的內(nèi)皮細胞的氧化損傷的影響。
　　研究結(jié)果表明，PGTS和PD具有較強地體外清除自由基的能力，具有較強的還原力，且呈濃度依賴

9、關(guān)系，可作為抗氧化劑使用。同時發(fā)現(xiàn)，三個不同劑量桔?？傇碥詹煌潭鹊亟档土孙曃垢咧閯┱T導(dǎo)的大鼠血清與肝臟高脂質(zhì)水平和氧化狀態(tài)；顯著升高大鼠肝臟LDL-r蛋白表達，降低了肝臟HMG-CoM還原酶合成，增強了肝臟CYP7A1基因表達，同時使糞便中的膽汁酸的排出量也顯著增大。
　　PD對內(nèi)皮細胞的干預(yù)結(jié)果表明，PD能顯著的降低內(nèi)皮細胞由氧化型低密度脂蛋白誘導(dǎo)的NO合成和MDA濃度；顯著地降低動脈細胞粘附分子和細胞粘附分的表達水平；顯著

10、地抑制單核細胞與內(nèi)皮細胞的粘附作用。
　　基于上述結(jié)果可以得出，PGTS具有較強的抗氧化能力，降低了大鼠體內(nèi)氧化狀態(tài)，減少了氧化損傷的機率，而 PD的抗動脈粥樣硬化活性至少部分地是因為其增加 NO濃度，降低OxLDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細胞粘附分子表達和減少內(nèi)皮細胞與單核細胞的粘附作用。
　　桔?？傇碥盏捏w內(nèi)外抗氧化作用與脂質(zhì)調(diào)節(jié)作用說明其降低脂質(zhì)水平的作用，特別是其對膽固醇水平的調(diào)節(jié)，是因為顯著升高大鼠肝臟 LDL-r蛋白表達，使血