MIF在EAE C57BL-6小鼠模型CNS的表達(dá)研究.pdf

1、目的：本研究觀察巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)在慢性EAE模型C57BL／6小鼠腦和脊髓中的動(dòng)態(tài)表達(dá)變化，旨在探討MIF與EAE／MS發(fā)病的關(guān)系。 方法：72只SPF級(jí)6-8周健康雌性C57BL／6小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組(20只)、佐劑組(20只)及：EAE模型組(32只)。模型組中發(fā)病小鼠又分為無(wú)癥狀期、發(fā)病初、發(fā)病高峰和慢性期組。用人工合成的mMOG35-55和完全弗氏佐劑免疫C57BL／6小鼠制成慢性EAE動(dòng)物模型，每只小

2、鼠注射0.2ml，其中含人工合成的mMOG<,35-55>300ug,完全福氏佐劑2mg，分4點(diǎn)皮下注射，基礎(chǔ)免疫1周后用同樣劑量加強(qiáng)免疫一次；免疫當(dāng)天和48小時(shí)后經(jīng)尾靜脈注射百日咳毒素O.5mg。免疫當(dāng)天定為第O天起至第40天實(shí)驗(yàn)終止前，每天8AM-8PM觀察動(dòng)物行為活動(dòng)，采用盲法，每天2人至少一次在同一時(shí)間稱體重并按Benson評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)做EAE嚴(yán)重性的臨床評(píng)估，模型的成功與否主要根據(jù)Benson評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)判定和病理學(xué)檢查，結(jié)合MRI結(jié)

3、果綜合評(píng)價(jià)；用免疫組化技術(shù)觀察空白對(duì)照組、佐劑對(duì)照組和模型組發(fā)病前、發(fā)病初、發(fā)病高峰和慢性期組腦和脊髓MIF的表達(dá)變化。 結(jié)果： 1．動(dòng)物模型 慢性EAE模型累計(jì)成功率為83.3％，死亡率為8.3％，模型組在 第一次免疫后14-20天發(fā)病，20-28天達(dá)高峰，28-40天穩(wěn)定，發(fā)病小鼠體重明顯減輕；空白對(duì)照組和佐劑對(duì)照組體重呈增加趨勢(shì)，Benson標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分為0分。發(fā)病小鼠HE和Weil氏髓鞘染色示小血管周

4、圍炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和髓鞘脫失；1.5T頭部和脊髓掃描發(fā)現(xiàn)，EAE組病變?cè)贛RI冠狀切面，橫斷面T2加權(quán)像及水抑制像可見(jiàn)多個(gè)散在長(zhǎng)T2高信號(hào)，但在T1加權(quán)像及脊髓信號(hào)不易辨認(rèn)。 2.MIF的表達(dá)變化： 對(duì)照組小鼠腦和脊髓僅有低水平的MIF表達(dá)。mMOG35-55免疫C57BL／6小鼠誘導(dǎo)的慢性EAE模型小鼠在無(wú)癥狀期和發(fā)病初即可見(jiàn)CNS中MIF表達(dá)升高，急性期中表達(dá)最高，慢性期有下降，前后時(shí)相點(diǎn)相比均有差異性(P<0.05)，且與對(duì)