成體神經(jīng)干細(xì)胞移植治療大鼠腦出血實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、中圖分類號(hào)R 7 4 3 ．3 4U D C 6 1 0學(xué)校代碼1 0 5 3 3密級(jí) 公開碩士學(xué)位論文成體神經(jīng)干細(xì)胞移植治療大鼠腦出血實(shí)驗(yàn)研究E x p e r i m e n t a l S t u d y o n A d u l t N e u r a lS t e mC e l l sT r a n s p l a n t a t i o n i nR a t w i t h I n t r a c e r e b r a lH

2、 e m o r r h a g e作者姓名 學(xué)科專業(yè) 研究方向?qū)W院( 系、所)指導(dǎo)教師彭俊臨床醫(yī)學(xué)外科學(xué)( 神經(jīng)外科)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬海L ] 醫(yī)院夏鷹教授論文答辯日期：絲出15 ：．歹口 答辯委員會(huì)主席：中 南 大 學(xué)2 0 1 3 年5 月成體神經(jīng)干細(xì)胞移植治療大鼠腦出血實(shí)驗(yàn)研究摘要目的：評(píng)估成體神經(jīng)干細(xì)胞移植治療大鼠腦出血療效，觀察移植的成體神經(jīng)干細(xì)胞在大鼠腦內(nèi)分化方向。方法：①取成年大鼠海馬齒狀回，通過機(jī)械分離及胰酶消化法制備單

3、細(xì)胞懸液；密度梯度離心及培養(yǎng)基選擇法獲取成體神經(jīng)干細(xì)胞懸液；體外培養(yǎng)、鑒定及標(biāo)記。②自體血紋狀體注入法制作大鼠腦出血模型2 0 只，選取L O N G A 評(píng)分相同的模型鼠1 0 只，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組( 注入神經(jīng)干細(xì)胞) 和對(duì)照組( 注入等量生理鹽水) 各5 只，術(shù)后2 4 小時(shí)，將體外培養(yǎng)并標(biāo)記的大鼠成體神經(jīng)干細(xì)胞通過立體定向腦實(shí)質(zhì)移植法移植入大鼠腦內(nèi)血腫周圍。③術(shù)后每周，連續(xù)7 周，采用旋轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)及肢體放置實(shí)驗(yàn)對(duì)大鼠進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試，以觀

4、察大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)狀況；7 周后行免疫組化檢測(cè)移植的成體神經(jīng)干細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)組大鼠腦內(nèi)的分化方向。結(jié)果：①成體神經(jīng)干細(xì)胞在體外懸浮培養(yǎng)時(shí)逐漸成球生艮，當(dāng)克隆球直徑達(dá)到1 6 0 ±l O u m 時(shí)，部分成體神經(jīng)干細(xì)胞開始長(zhǎng)出突起，克隆球中央細(xì)胞因缺乏營(yíng)養(yǎng)開始死亡，傳至第三代時(shí)，細(xì)胞仍能保持較高的增殖能力。②自體血注入大鼠腦內(nèi)紋狀體后，大鼠出現(xiàn)明顯腦出血癥狀及體征。③成體神經(jīng)干細(xì)胞移植入大鼠腦出血模型腦內(nèi)后，實(shí)驗(yàn)組大鼠神經(jīng)功能修復(fù)

5、與對(duì)照組相比，存在顯著差異( P < O ．0 5 ) ；7周后，實(shí)驗(yàn)組大鼠腦內(nèi)部分細(xì)胞B R D U ／G F A P ，B R D U ／N E U N 免疫組化雙標(biāo)染色陽(yáng)性。結(jié)論：①成年大鼠海馬齒狀回顆粒下區(qū)存在可以分離提取的成體神經(jīng)干細(xì)胞。②自體血紋狀體注入法能獲得較為穩(wěn)定的腦出血模型。⑧成體神經(jīng)下細(xì)胞移植入大鼠腦出血模型體內(nèi)后能顯著促進(jìn)大鼠神經(jīng)功能修復(fù)；7 周后，移植的細(xì)胞能在大鼠體內(nèi)分化為表達(dá)神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞特異性標(biāo)志