弓形蟲信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白14-3-3和主要膜表面抗原SAG1基因的克隆、表達(dá)及免疫學(xué)診斷.pdf_第1頁
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1、目的:體外擴(kuò)增弓形蟲RH株信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白14-3-3(Toxo14-3-3)和膜表面主要抗原SAG1編碼基因,克隆至原核表達(dá)載體pET28a,并表達(dá)出Toxo14-3-3和SAG1重組蛋白.利用此重組蛋白,探討rToxo14-3-3和rSAG1用于診斷弓形蟲感染的價(jià)值.方法:收集、純化弓形蟲RH株速殖子,提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄生成cDNA,然后以其為模板擴(kuò)增出Toxo14-3-3、SAG1編碼基因,將擴(kuò)增產(chǎn)物克隆入原核表達(dá)載體pET28a.

2、在原核細(xì)胞表達(dá)Toxo14-3-3、SAG1重組蛋白.重組子雙酶切、PCR和測(cè)序鑒定,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21,并以IPTG誘導(dǎo)表達(dá).制備、純化rToxo-14-3-3和rSAG1蛋白抗原,利用純化的rToxo-14-3-3和rSAG1抗原,間接ELISA法探討其診斷弓形蟲病的價(jià)值.結(jié)論:成功地從弓形蟲RH株基因組DNA中獲取了14-3-3基因和SAG1基因,構(gòu)建了pET28a/Toxo14-3-3和pET28a/SAG1重組質(zhì)粒,并獲得了

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