骨髓間充質干細胞在腎小管間質纖維化大鼠模型中腎臟分布的研究.pdf

1、目的：腎小管間質纖維化(TIF)是進行性腎臟損害的主要病理學特征，是幾乎所有腎臟疾病進展至終末期腎功能衰竭的共同路徑。完全阻斷TIF是治療的臨床難題。骨髓間充質干細胞在適宜的條件下可分化為成骨細胞、成軟骨細胞、心肌細胞和脂肪細胞等，由于其取材容易，能穩(wěn)定表達目的基因表型，耐受機體免疫，無致瘤性，為疾病移植治療提供了新的途徑。研究證實急性腎臟損傷小鼠模型中，骨髓間充質干細胞可以分化為正常腎臟細胞促進結構修復、改善腎功能。本研究探討體外擴增

2、及鑒定骨髓間充質干細胞的方法；采用單側輸尿管結扎建立大鼠TIF模型；TIF早期經(jīng)鼠尾靜脈注射擴增的間充質干細胞，了解間充質干細胞是否可以在纖維化微環(huán)境下靶向定位于梗阻的腎臟，為今后的研究提供理論和實驗依據(jù)。 方法：①細胞分離純化：貼壁細胞分離法和密度梯度離心法相結合分離純化SD大鼠骨髓間充質干細胞。②細胞生物學特性鑒定：倒置顯微鏡下觀察細胞生長及形態(tài)；MTT法測定P1、P3、P6代細胞生長曲線；細胞爬片行糖原染色、堿性磷酸酶染色

3、；免疫細胞化學染色鑒定細胞表面標記物CD31、CD44、CD45、CD90的表達；傳代細胞用含地塞米松、β-甘油磷酸鈉和維生素C的條件培養(yǎng)液誘導向成骨細胞分化，VonKossa染色觀察細胞鈣化結節(jié)。③細胞腺病毒轉染：綠色熒光蛋白(GFP)基因的重組腺病毒載體感染間充質干細胞，觀察轉染效率。④大鼠體內實驗：單側輸尿管結扎術后7天，經(jīng)鼠尾靜脈注射GFP(+)間充質干細胞。分別在移植后2周和4周隨機處死大鼠，對腎臟組織進行病理學分析。石蠟切片