骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對腺嘌呤致腎間質(zhì)纖維化大鼠模型的影響.pdf

1、目的：
　　 各種腎臟疾病進展到終末期腎衰竭的共同途徑為腎間質(zhì)纖維化。研究如何延緩、阻止甚至逆轉(zhuǎn)腎間質(zhì)纖維化為當(dāng)前研究的熱點問題.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可分化為腎組織的多種細(xì)胞并參與腎損傷后的修復(fù)和再生.骨髓MSCs移植在幾種常用的腎間質(zhì)纖維化動物模型中得到應(yīng)用，并取得不同的治療效果。腺嘌呤致腎間質(zhì)纖維化模型近年來廣泛應(yīng)用于藥物研究領(lǐng)域，但CNKI及Pubmed檢索未見有關(guān)骨髓MSCs移植對于該模型大鼠作用的報道。
　　 本實

2、驗通過體外分離、培養(yǎng)、純化和擴增大鼠骨髓MSCs，用帶有綠色熒光蛋白基因的腺病毒（Ad-GFP）進行轉(zhuǎn)染，并建立腺嘌呤致大鼠腎間質(zhì)纖維化模型，將轉(zhuǎn)染Ad-GFP的MSCs移植入大鼠體內(nèi)，觀察骨髓MSCs移植后在腎臟中的分布并檢測大鼠腎功能、尿蛋白定量，a-SMA表達(dá)量的變化探討骨髓MSCs移植對腺嘌呤所致腎間質(zhì)纖維化大鼠模型的影響。
　　 材料與方法：
　　 體外分離、培養(yǎng)Wistar大鼠MSCs，免疫組化方法進行CD9

3、0、CD34鑒定；以不同強度攜帶綠色熒光蛋白的重組腺病毒（Ad-GFP）轉(zhuǎn)染MSCs，用流式細(xì)胞儀測定轉(zhuǎn)染效率，篩選出最佳轉(zhuǎn)染強度（MOI），并以最佳轉(zhuǎn)染強度將HGF基因體外轉(zhuǎn)染MSCs。
　　 選擇3月齡Wistar大鼠25只，隨機分為正常對照組及模型組，模型組給予腺嘌呤100mg/Kg/d灌胃30天，各組隨機取5只留尿取腎。停藥3個月后，將剩余模型組分為移植組與非移植組，移植組給予Ad-GFP轉(zhuǎn)染的MSCs移植，對照組注射等

4、量的無血清培養(yǎng)基，于移植后30天留尿取腎，取雙側(cè)腎臟，制作石蠟切片，HE、PAS、Masson染色，免疫熒光雙標(biāo)記，免疫組化a-SMA。
　　 結(jié)果：
　　 1.骨髓MSCs原代培養(yǎng)7-9天可以傳代，傳代后細(xì)胞增殖加快，4-5天可再次傳代；免疫組化結(jié)果顯示骨髓MSCs中CD90陽性、CD34陰性。
　　 2.轉(zhuǎn)染強度MOI=400時，轉(zhuǎn)染效率為54.1％
　　 3.成功以100mg/kg/d腺嘌呤灌胃制作

5、大鼠腎間質(zhì)纖維化模型。
　　 4.免疫熒光結(jié)果顯示：移植組腎間質(zhì)區(qū)可見大量綠色熒光細(xì)胞，隨機計數(shù)5個視野內(nèi)熒光雙標(biāo)記細(xì)胞占所有顯示綠色熒光細(xì)胞的比例約為31.4％。
　　 5.移植組肌酐尿素氮較非移植組顯著升高，24小時尿蛋白定量增多，腎臟病理評分多，a-SMA表達(dá)強于非移植組，而與正常對照組相比均有顯著差異。
　　 結(jié)論：
　　 在腺嘌呤致腎間質(zhì)纖維化大鼠模型中，經(jīng)鼠尾靜脈注射Ad-GFP轉(zhuǎn)染的MSCs