PI3K-Akt信號通路對小膠質(zhì)細(xì)胞功能及其膜表面TNFR表達(dá)的影響.pdf

1、目的:觀察PI3K/Akt信號通路對小膠質(zhì)細(xì)胞功能及其膜表面TNFR表達(dá)的影響，探討小膠質(zhì)細(xì)胞功能狀態(tài)變化的可能機(jī)制。
　　方法:用BV2和PC12兩種細(xì)胞株分別代表小膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元。評價(jià)小膠質(zhì)細(xì)胞功能的體系是應(yīng)用BV2細(xì)胞的培養(yǎng)液培養(yǎng)PC12細(xì)胞，通過MTT法檢測PC12細(xì)胞存活率來反映BV2細(xì)胞功能。為明確PI3K/Akt信號通路對小膠質(zhì)細(xì)胞功能的影響，將PC12細(xì)胞分為:常氧培養(yǎng)組、常氧過氧化氫損傷組、低氧培養(yǎng)組及低氧PI

2、3K/Akt信號通路阻滯劑組。為明確不同功能狀態(tài)小膠質(zhì)細(xì)胞PI3K/Akt信號通路對TNFR表達(dá)的影響，將BV2細(xì)胞分為:常氧培養(yǎng)組，低氧培養(yǎng)組及低氧PI3K/Akt信號通路阻滯劑組。應(yīng)用Westernblot法檢測PI3K/Akt信號通路Akt蛋白及其磷酸化水平和TNFR蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.以常氧培養(yǎng)組PC12細(xì)胞存活率為100％來計(jì)算，常氧過氧化氫損傷組PC12細(xì)胞的存活率為51.13±1.24％。分別低氧

3、1.5h、4h、8h、14hPC12細(xì)胞存活率對應(yīng)為78.41±2.23％、51.60±0.51％、33.63±1.02％、23.62±2.91％，與常氧過氧化氫損傷組比較，細(xì)胞存活率在低氧1.5h組顯著提高，低氧8h及以上組顯著下降，(P＜0.05)。加入PI3K/Akt信號通路阻滯劑后，與各對應(yīng)低氧組比較，細(xì)胞存活率均顯著下降(P＜0.05)，其值分別為55.24±0.98％、34.91±0.67％、21.44±1.73％、11.0

4、2±1.76％。
　　2.常氧培養(yǎng)組BV2細(xì)胞p-Akt蛋白表達(dá)量為65.94±1.66。低氧1.5h、4h、8h、14hp-Akt表達(dá)量分別為74.15±2.69、68.45±1.68、45.66±2.36、42.81±1.05，與常氧培養(yǎng)組比較，p-Akt表達(dá)量低氧1.5h組明顯增高，低氧8h及以上組顯著下降(P＜0.05)。
　　3.常氧條件下BV2細(xì)胞TNFR1、TNFR2均有一定量表達(dá)，以后者表達(dá)為主，其量分別為6

5、.54±0.18，15.27±0.13。低氧1.5h、4h、8h、14hTNFR1的表達(dá)量分別為8.01±0.13、8.87±0.57、16.33±0.98、17.84±0.53;TNFR2表達(dá)量分別為19.92±0.64、15.58±0.83、12.79±0.47、10.32±0.93。低氧1.5hTNFR1與TNFR2表達(dá)均升高，且以TNFR2升高為主;隨著低氧時(shí)間延長，TNFR1的表達(dá)量進(jìn)一步增加而TNFR2表達(dá)則減少，除TNFR

6、2低氧4h組，余各低氧組與常氧培養(yǎng)組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。加入PI3K/Akt信號通路阻滯劑，對應(yīng)時(shí)間低氧培養(yǎng)的BV2細(xì)胞TNFR2表達(dá)量均下降，分別為15.86±0.54，11.83±0.74，6.87±0.47，6.01±0.53，與各對應(yīng)低氧組比較差異顯著(P＜0.05);而相應(yīng)組別TNFR1表達(dá)量為7.79±0.57、9.27±0.76、17.87±1.29、17.78±0.73，與各對應(yīng)低氧組比較，差異無統(tǒng)計(jì)