EGCG對(duì)ACC-M細(xì)胞株P(guān)I3K-Akt信號(hào)通路中Akt、p-Akt、NF-κB表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過(guò)將EGCG與PI3K抑制劑LY294002分別、聯(lián)合應(yīng)用于ACC-M細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞的生存情況及Akt、p-Akt、NF-κB的表達(dá)情況，初步探討EGCG對(duì)涎腺腺樣囊性癌的作用機(jī)制。
　　方法：
　　1、MTT法測(cè)定不同濃度EGCG與LY294002分別作用ACC-M細(xì)胞24h、48h、72h的抑制率，計(jì)算藥物半抑制濃度(IC50)；將實(shí)驗(yàn)分為陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組(LY294002 IC50)、EGCG IC50組

2、、EGCG IC20+LY294002 IC10組、EGCG IC40+LY294002 IC10組，測(cè)定48h細(xì)胞抑制率。
　　2、普通光學(xué)倒置顯微鏡觀察各組藥物作用48h細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。
　　3、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組藥物作用48h細(xì)胞凋亡情況。
　　4、Western blot檢測(cè)各組藥物作用48h后細(xì)胞中Akt、p-Akt、NF-κB的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、不同濃度的EGCG(62.5μM、125

3、μM、250μM、500μM)與不同濃度的LY294002(6.25μM、12.5μM、25μM、50μM、100μM)分別作用ACC-M細(xì)胞24h、48h、72h，與陰性對(duì)照組相比EGCG、LY294002對(duì)ACC-M對(duì)細(xì)胞的抑制作用具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。藥物作用48h時(shí) EGCG與 LY294002的IC50分別為156.28μM與30.88μM。陽(yáng)性對(duì)照組、EGCG IC50組、EGCG IC20+LY294002 IC

4、10組、EGCG IC40+LY294002 IC10組的48h細(xì)胞抑制率分別為51.65％、51.48%、31.52%和56.65%。
　　2、細(xì)胞觀察實(shí)驗(yàn)可見(jiàn)藥物作用ACC-M細(xì)胞48h后，細(xì)胞數(shù)量減少、間隙增加，由多邊形變?yōu)樗笮危?xì)胞脫壁，部分細(xì)胞漂浮在培養(yǎng)基中呈凋亡狀態(tài)。
　　3、流式細(xì)胞術(shù)示所有用藥組細(xì)胞凋亡率均高于陰性對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；EGCG IC50組細(xì)胞凋亡率低于陽(yáng)性對(duì)照組，而EGC

5、G IC40+LY294002 IC10組細(xì)胞凋亡率高于陽(yáng)相對(duì)照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　4、Western blot示，與陰性對(duì)照組相比，所有用藥組的p-Akt表達(dá)降低(P<0.05)；EGCG IC50組、EGCG IC20+LY294002 IC10組、EGCG IC40+LY294002 IC10組的Akt、NF-κB表達(dá)量均低于陰性對(duì)照組(P<0.05)。
　　結(jié)論：EGCG、LY294002