TNBC和非TNBC CD44+CD24-ESA+表型的細(xì)胞亞群的研究.pdf

1、目的：
　　進(jìn)行原代和傳代細(xì)胞培養(yǎng)，明確原代培養(yǎng)的乳腺癌細(xì)胞群中是否存在CD44+CD24-ESA+細(xì)胞亞群，測定并比較原代細(xì)胞和傳代細(xì)胞CD44+CD24-ESA+細(xì)胞亞群的比例及兩者差異。通過前者建立的實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)，探討(CD44+CD24-ESA+)CD44+CD24-/low細(xì)胞亞群在TNBC和非TNBC中的表達(dá)差異，揭示CD44+CD24-/low-表型細(xì)胞亞群和TNBC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)、全身器官轉(zhuǎn)移等臨床病理特征及預(yù)

2、后之間的關(guān)系。
　　方法：
　　1.收集2011.5-2011.10期間15例原發(fā)性乳腺癌手術(shù)后新鮮腫瘤組織標(biāo)本，進(jìn)行乳腺癌細(xì)胞的原代培養(yǎng)和1028系乳腺癌細(xì)胞的傳代培養(yǎng)，應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)篩選原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的乳腺癌CD44+CD24-ESA+細(xì)胞亞群。
　　2.收集2011.5-2011.10期間相應(yīng)臨床分期TNBC病人和非TNBC病人手術(shù)后新鮮腫瘤組織標(biāo)本各8例進(jìn)行原代培養(yǎng)，應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)篩選并測定CD44+C

3、D24-ESA+細(xì)胞亞群的比例，進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　3.收集2005-2007年問的60例TNBC病人的術(shù)后蠟塊標(biāo)本，同時隨機(jī)選取60例同時期相應(yīng)臨床分期的非TNBC病人術(shù)后蠟塊標(biāo)本，應(yīng)用免疫組化雙染技術(shù)檢測TNBC病人和非TNBC病人的術(shù)后標(biāo)本，分析兩組病人CD44+CD24-/low細(xì)胞亞群所占比例的差異，進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1.成功培養(yǎng)出人類乳腺癌原代細(xì)胞，并篩選出原代培養(yǎng)乳腺癌細(xì)胞群中的CD44

4、+CD24-ESA+細(xì)胞亞群，測定出CD44+CD24-ESA+細(xì)胞亞群在原代細(xì)胞和1028系傳代細(xì)胞中的比例分別為(2.90±1.63)％和(6.32±0.25)％，差異有統(tǒng)計意義(t=5.034，P=0.000)。
　　2.利用流式細(xì)胞技術(shù)成功的從原代培養(yǎng)的三陰組和非三陰組篩選出CD44+CD24-ESA+細(xì)胞亞群，其在三陰組和非三陰組所占的比例各自為(4.0±0.91)％，(1.6±0.71)％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=6.9

5、31，P=0.000)。
　　3.應(yīng)用免疫組化雙染技術(shù)檢測三陰組和非三陰組的術(shù)后蠟塊標(biāo)本，進(jìn)行CD44、CD24染色，CD44+CD24-/low細(xì)胞在三陰組和非三陰組的陽性表達(dá)率分別為60.0％，31.7％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=9.701，P=0.002)。
　　4.統(tǒng)計結(jié)果證實(shí)，TNBC中，CD44+CD24-/low細(xì)胞陽性組的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率83.3％、復(fù)發(fā)率38.9％、轉(zhuǎn)移率61.1％均高于CD44+CD24-/l

6、ow細(xì)胞陰性組，分別為45.8％、4.2％、33.3％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；CD44+CD24-/low細(xì)胞陽性組的5年生存率為50.0％，CD44+CD24-/low細(xì)胞陰性組的5年生存率為75.0％，兩組間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=4.882，P=0.027)。
　　結(jié)論：
　　1.本實(shí)驗(yàn)成功從乳腺癌術(shù)后手術(shù)標(biāo)本中培養(yǎng)出乳腺癌原代細(xì)胞，通過標(biāo)記CD44+CD24-ESA+，可以應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)成功從乳腺癌原

7、代細(xì)胞和1028系傳代細(xì)胞中分選出CD44+CD24-ESA+細(xì)胞亞群，證實(shí)了原代乳腺癌細(xì)胞中CD44+CD24-ESA+細(xì)胞亞群的存在。統(tǒng)計分析證實(shí)，1028系傳代細(xì)胞中CD44+CD24-ESA+細(xì)胞亞群比例要高于乳腺癌原代細(xì)胞。
　　2.利用流式細(xì)胞技術(shù)成功的從原代培養(yǎng)的三陰組和非三陰組篩選出CD44+CD24-ESA+細(xì)胞亞群，統(tǒng)計分析證實(shí)CD44+CD24-ESA+細(xì)胞亞群在三陰組的比例要高于非三陰組。初步判斷TNBC較