CD4+調節(jié)性T細胞在SLE免疫病理損傷機理中的作用.pdf

1、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是一種慢性自身免疫性疾病，其特點是自身免疫耐受機制失衡，免疫功能紊亂，機體產(chǎn)生大量針對細胞核、細胞漿和細胞表面成分的自身抗體。免疫耐受機制失衡包括T細胞凋亡、B細胞異常高反應性和調節(jié)性T(regulatory T，Treg)細胞數(shù)量和功能的紊亂等。Treg細胞是不同于Th1和Th2細胞的、具有免疫抑制和調節(jié)功能的T淋巴細胞亞群，在免疫耐受中發(fā)揮重要作用。T

2、reg細胞比例和功能的異常，可導致免疫自身耐受失衡、進而引起多種自身免疫性疾病，已成為免疫學領域研究的重要內容。近年來有很多有關SLE疾病狀態(tài)Treg細胞數(shù)量和功能出現(xiàn)變化的研究報道，但各研究小組的結果并不一致。Treg細胞在患者外周血中的比例降低、升高或不變均有報道；其免疫抑制功能下降或不變也有報道。這些數(shù)據(jù)的差異可能源于被研究的患者來源于不同的種族、處于疾病的不同階段、接受了不同的治療、或者研究者定義Treg時采用不同的表面分子標記

3、分類所造成的。另外，越來越多的證據(jù)顯示Treg細胞是一個龐大的家族，其中可能包括了功能和機制不同的細胞亞群，所以深入針對其亞群進行研究可能有助于理解其在SLE免疫病理機制中的作用。
　　 可誘導共刺激分子(Inducible Costimulatory，ICOS)是新發(fā)現(xiàn)的表達于活化T細胞表面的共刺激分子，屬于CD28/CTLA-4家族。盡管以往大多數(shù)研究認為ICOS是一種對效應性T細胞產(chǎn)生正性共刺激作用的分子；但是，最新的研究

4、認為ICOS在免疫耐受中也發(fā)揮重要作用。根據(jù)ICOS在Treg細胞上的表達，Treg細胞可分為CD4+ICOS+Foxp3+T細胞亞群和CD4+ICOS-Foxp3+T細胞亞群。其中CD4+ICOS+Foxp3+T細胞亞群分泌IL-10的能力在所有CD4+T細胞中居首位，可能參與了多種腫瘤和自身免疫性疾病的病理機制。
　　 盡管目前普遍認為IL-10是一種抗炎癥因子，但已有研究證明在SLE的免疫病理狀態(tài)中，IL-10可能無法正常

5、的發(fā)揮其抗炎癥及免疫抑制功能；相反在SLE中IL-10可能具有復雜的前期促炎癥效應，如促進血小板活化因子的形成、誘導T細胞的凋亡和促進B細胞的活化等。因此本研究將針對CD4+ICOS+Foxp3+T細胞亞群在SLE患者外周血中的比例變化和其參與SLE免疫病理損傷的可能機制進行探討。
　　 另外，鑒于Treg細胞在SLE免疫耐受調節(jié)中的重要作用，如何有效補充功能性Treg細胞替代性治療成為近年來探討的熱點。早期有研究發(fā)現(xiàn)：通過急性

6、饑餓或者卡路里限制能夠減輕自身免疫性疾病的臨床癥狀和病理損傷，但其具體的機制目前并不完全清楚。我們知道，在急性饑餓或卡路里限制狀態(tài)下，機體循環(huán)內瘦素水平顯著下降，那么瘦素作為Treg細胞增殖的一個抑制因素，能否在急性饑餓的狀態(tài)下促進機體Treg細胞的比例上調？并對Treg細胞的免疫抑制功能產(chǎn)生影響？為解決以上提出的問題，本實驗分為兩部分：
　　 第一部分、CD4+ICOS+Foxp3+T細胞在SLE患者外周血中的比例變化及與疾病

7、嚴重度的關系
　　 目的：觀察不同疾病狀態(tài)SLE患者外周血CD4+ICOS+Foxp3+T細胞的比例變化及其與臨床實驗室疾病評價指標、疾病嚴重程度的相關性，分析該亞群細胞在SLE免疫病理損傷中的作用和意義。
　　 方法：采用流式細胞術檢測32名SLE患者、10名RA患者及22名正常對照人群的外周血中CD4+ICOS+Foxp3+T細胞、CD4+ICOS-Foxp3+T細胞和CD4+Foxp3+T細胞的比例以及這些T細胞亞

8、群細胞內IL-10和膜表面TGF-β的表達水平；采用ELISA的方法檢測各實驗組和對照組患者外周血漿中IL-10和TGF-β的水平。
　　 結果：SLE患者外周血中的CD4+ICOS+Foxp3+T細胞的比例顯著高于RA患者和正常對照組，且與疾病活動指數(shù)(SLEDAI)和血清中抗雙鏈DNA的水平(anti-dsDNA)成正相關；與血清中補體3(C3)的水平呈負相關。另外，SLE患者外周血CD4+ICOS+Foxp3+T細胞中能夠

9、分泌IL-10的細胞比例顯著高于CD4+ICOS-Foxp3+T細胞，其CD4+ICOS+Foxp3+T細胞在循環(huán)中的比例與患者血漿中IL-10水平成正相關。
　　 結論：在SLE患者外周血中比例升高的CD4+ICOS+Foxp3+T細胞亞群可能在SLE免疫病理損傷中具有潛在的重要性。由于CD4+ICOS+Foxp3+T細胞在SLE外周血中的比例受藥物治療的影響較小，分析外周血中CD4+ICOS+Foxp3+T細胞的比例變化有助

10、于我們評價SLE患者病情的嚴重度。
　　 第二部分、急性饑餓對狼瘡傾向小鼠Treg細胞數(shù)量和功能的影響
　　 目的：探討急性饑餓對狼瘡傾向小鼠Treg細胞數(shù)量和功能的影響以及瘦素在急性饑餓影響Treg細胞比例變化中的作用。
　　 方法：將野生型小鼠(wild type，WT)、瘦素缺陷型小鼠(leptin-deficient B6 ob/ob，ob/ob)、瘦素受體缺陷的小鼠(leptin recepter-de

11、ficient B6 db/db，db/db)和NZB/W小鼠分別分為三個不同處理組：第一組為空白對照(正常進食)；第二組小鼠急性饑餓48h、但正常供應水，同時腹腔注射0.2mlPBS，一天2次；第三組小鼠急性饑餓48h、但正常供應水，同時腹腔注射溶于0.2mlPBS的瘦素(按小鼠每g體重1μg瘦素計算)，一天2次。采用流式細胞術檢測循環(huán)中Treg細胞(CD4+CD25+Foxp3+T細胞)的比例，使用CFSE和ELISA方法檢測Tre

12、g細胞在體外抑制效應T細胞增殖和分泌IFN-γ的功能；同時比較各處理組小鼠體重、脾細胞數(shù)量和血漿中瘦素水平的變化。
　　 結果：通過48小時的急性饑餓，在WT和NZB/W小鼠血循環(huán)中Treg細胞比例升高，但可經(jīng)瘦素的補充所逆轉；Treg細胞的免疫抑制功能并無顯著變化。在ob/ob小鼠和db/db小鼠中，48小時的急性饑餓對循環(huán)中Treg細胞的比例無顯著影響。對ob/ob小鼠急性饑餓48h，同時補充瘦素可降低其循環(huán)中Treg細胞的