DYSFERLINOPATHY分子免疫病理學(xué)研究.pdf

1、目的：Dysferlinopathy是由于dysferlin基因突變導(dǎo)致的一組以進(jìn)行性肌無力為特征的遺傳性肌病。Dysferlin是骨骼肌上的一種與肌細(xì)胞膜自身修復(fù)有關(guān)的跨膜蛋白。Dysferlin基因的突變類型多樣復(fù)雜，無明顯突變熱點(diǎn)，因此個(gè)體間存在表型異質(zhì)性。目前發(fā)現(xiàn)dysferlinopathy有三種臨床表現(xiàn)型：肢帶型肌營(yíng)養(yǎng)不良2B(1imb-girdle muscular dystrophy 2B；LGMD2B)、Myoshi型

2、肌營(yíng)養(yǎng)不良(Miyoshi musculardystrophy；MMD)和脛骨前群肌病(Distal anteriorcompartment myopathy)。它們具有共同骨骼肌病理表現(xiàn)：不同程度肌細(xì)胞變性、壞死、再生，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。分子病理：抗-dysferlin單克隆抗體免疫組織化學(xué)染色，dysferlin蛋白在肌細(xì)胞膜完全缺失。 LGMD2B和多發(fā)性肌炎(polymyositis，PM)的臨床和組織病理學(xué)表現(xiàn)具有一定的相

3、似性，有時(shí)很難鑒別，dysferlin單克隆抗體免疫組化染色是鑒別的關(guān)鍵。 本研究探討dysferlin蛋白的功能及與相關(guān)蛋白的關(guān)系；Dysferlinopathy的炎性反應(yīng)機(jī)制及與炎性肌病的關(guān)系。提高分子病理學(xué)診斷dysferlinopathy的意識(shí)，對(duì)于診斷、鑒別診斷困難病例應(yīng)積極行免疫組織化學(xué)染色病理診斷，并探討治療方法。 方法：根據(jù)抗-dysferlin單克隆抗體免疫組織化學(xué)染色，肌細(xì)胞膜dysferlin蛋白完

4、全缺失患者8例入選病例組，根據(jù)最初受累病變部位不同進(jìn)行分型診斷，下肢近端肌群最先受累患者診為L(zhǎng)GMD2B；下肢遠(yuǎn)端后群肌，主要是腓腸肌最先受累患者診為MMD；最先受累肌群為下肢遠(yuǎn)端前群肌的為Distal anterior compartment myopathy。對(duì)照組為炎性肌病患者，包括多發(fā)性肌炎7例、皮肌炎2例、包涵體肌炎1例，均根據(jù)國(guó)際診斷標(biāo)準(zhǔn)確診。兩組患者骨骼肌標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行抗-CD4<'+>T細(xì)胞、CD8<'+>T細(xì)胞、MHC-

5、1分子單克隆抗體免疫組織化學(xué)染色，光鏡下觀察浸潤(rùn)炎性細(xì)胞的類型、分布特點(diǎn)，并進(jìn)行定量分析，兩樣本t檢驗(yàn)處理數(shù)據(jù)。觀察MHC-I陽性肌細(xì)胞分布特點(diǎn)、程度及與炎性細(xì)胞分布的關(guān)系。對(duì)比兩組，探討dysferlinopathy炎性反應(yīng)機(jī)制，提出診斷和鑒別診斷意義，探討有效治療。 結(jié)果： 1 病例組入選8名患者，其中LGMD283例；MMD5例，無Distal anterior compartment myopathy。平均發(fā)病年

6、齡在16-46歲，病程5-16年不等。1例有陽性家族史。所有dysferlinopathy患者的肌酸激酶水平均增高，數(shù)值變化在2283-11000U/L。肌電圖：LGMD2B均為肌源性改變；MMD中2例早期可見神經(jīng)源性改變，晚期呈現(xiàn)肌源性改變，其余3例呈肌源性改變。 骨骼肌組織化學(xué)染色病理分析：病例組所有患者均呈肌營(yíng)養(yǎng)不良改變：不同程度肌細(xì)胞變性、壞死和再生。炎性反應(yīng)活躍(酸性磷酸酶染色)，其中2例多數(shù)肌細(xì)胞已被脂肪組織取代，炎

7、性反應(yīng)不明顯。對(duì)照組：PM肌細(xì)胞變性壞死明顯，部分呈灶性分布，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；DM可見束周萎縮，壞死細(xì)胞和炎性細(xì)胞主要分布在束周萎縮纖維和血管周圍。 IBM可見邊緣空泡，剛果紅染色可見淀粉樣物質(zhì)沉積。 分子病理：抗-dysferlin單克隆免疫組織化學(xué)染色，病例組骨骼肌細(xì)胞膜dysferlin蛋白完全缺失，對(duì)照組dysferlin蛋白表達(dá)正常。 2 病例組和對(duì)照組抗-CD4<'+>T細(xì)胞、CD8<'+>T細(xì)胞、

8、MHC-1分子單克隆抗體免疫組織化學(xué)染色，病理分析。隨機(jī)觀察3個(gè)不同視野，病例組患者幾乎均未見CD8<'+>T細(xì)胞表達(dá)，少量CD4<'+>T細(xì)胞表達(dá)，分布在細(xì)胞外基質(zhì)、血管周圍和變性、壞死肌細(xì)胞內(nèi)。對(duì)照組PM和IBM主要是CD8<'+>T細(xì)胞表達(dá)，分布在肌內(nèi)膜、變性壞死肌細(xì)胞內(nèi)和血管周圍；DM主要是CD4<'+>T細(xì)胞表達(dá)，主要分布在束周萎縮纖維和血管周圍。Dysferlinopathy的T細(xì)胞、CD8<'+>T細(xì)胞計(jì)數(shù)，明顯少于PM，

9、兩樣本t檢驗(yàn)分析數(shù)據(jù)，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 兩組患者均呈現(xiàn)MHC-I分子在骨骼肌細(xì)胞膜增強(qiáng)表達(dá)。Dysferlinopathy患者中5例僅在血管周圍、變性和壞死肌細(xì)胞膜表達(dá)，其余3例同時(shí)在形態(tài)正常肌細(xì)胞膜表達(dá)，8例表達(dá)MHC-1陽性肌細(xì)胞占相同視野肌細(xì)胞總數(shù)的比值均<25％，其周圍多有炎性細(xì)胞積聚，有的呈灶性分布。對(duì)照組MHC-I陽性表達(dá)分布：PM和IBM多分布在形態(tài)正常、變性壞死肌細(xì)胞膜和血管周圍：DM多分布在束周萎縮

10、肌細(xì)胞膜和血管周圍，陽性表達(dá)比例最低在50％-75％。 結(jié)論： 1 肌細(xì)胞變性壞死是Dysferlinopathy的組織病理學(xué)特征之一，與多發(fā)性肌炎相似，難以鑒別。 2 Dysferlinopathy主要浸潤(rùn)的炎性細(xì)胞不是T細(xì)胞，幾乎未見CD8+T細(xì)胞浸潤(rùn)；骨骼肌細(xì)胞表面上調(diào)表達(dá)MHC-I，表達(dá)程度不如炎性肌病明顯。 3 Dysferlin蛋白缺失，是dysferlinopathy肌細(xì)胞變性壞死的關(guān)鍵因素