胰島素對脂多糖誘導(dǎo)膿毒癥大鼠腦損傷的保護作用及機制.pdf

1、目的：
　　解偶聯(lián)蛋白2(UCP2)是位于線粒體內(nèi)膜的陰離子轉(zhuǎn)運蛋白，它可調(diào)節(jié)能量代謝并減少ROS的生成。UCP2的神經(jīng)保護作用在帕金森病、腦缺血、癲癇等多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病中得到廣泛證實。研究表明，膿毒癥時，胰島素不僅有降低血糖、調(diào)節(jié)代謝的作用，還具有減少ROS產(chǎn)生、對抗氧化應(yīng)激、抗凋亡、保護線粒體等作用，但其具體機制并不十分明確。既往有體外研究表明胰島素可能通過上調(diào)UCP2的表達，減少活性氧(ROS)的生成，進而發(fā)揮抗氧化的保護作

2、用。本研究擬探討胰島素對膿毒癥腦組織損傷的保護作用，探討UCP2在膿毒癥大鼠腦組織中的表達，及胰島素對其表達的影響，探討UCP2在胰島素保護作用中的可能作用，進一步為膿毒癥時胰島素的臨床應(yīng)用提供實驗及理論依據(jù)。
　　方法：
　　行胰島素濃度梯度預(yù)實驗，根據(jù)大鼠血糖情況及生存率確定胰島素濃度后，將50只SPF級雄性SD大鼠，按隨機數(shù)字表法隨機分為正常對照組(n=10)、膿毒癥組(n=20)和胰島素組(n=20)。通過腹腔注射革

3、蘭陰性菌脂多糖(LPS)15mg/kg建立膿毒癥大鼠模型。胰島素組在造模前30分鐘予皮下注射長效胰島素1U/kg（預(yù)實驗確定），膿毒癥組皮下注射等量生理鹽水。LPS造模后24h，每組各取8只處死，留取大腦皮質(zhì)。提取大腦皮質(zhì)線粒體測定線粒體活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活力;Western blot檢測Bcl-2、Bax、活化的Caspase-9（Cleaved Caspase-9）的蛋白表達;TUNEL

4、染色檢測大腦皮質(zhì)神經(jīng)細胞凋亡;蘇木精-伊紅(HE)染色觀察大腦皮質(zhì)病理改變;RT-PCR檢測大腦皮質(zhì)UCP2的mRNA表達;Western blot和免疫組化檢測皮質(zhì)組織UCP2蛋白的表達。
　　結(jié)果：
　　1.與正常對照組相比，膿毒癥組及胰島素組大鼠皮質(zhì)組織線粒體ROS和MDA水平明顯升高，而SOD活力明顯下降，均P＜0.05;而與膿毒癥組相比，胰島素組大鼠皮質(zhì)組織線粒體ROS和MDA水平下降，且SOD活力回升，均P＜0.

5、05;
　　2.與正常對照組相比，膿毒癥組及胰島素組大鼠大腦皮質(zhì)組織神經(jīng)細胞凋亡增加，膿毒癥組抗凋亡蛋白Bcl-2表達下降，而促凋亡蛋白Bax和Cleaved Caspase-9表達升高，均P＜0.05;而與膿毒癥組相比，胰島素組大鼠皮質(zhì)組織神經(jīng)細胞凋亡減少，抗凋亡蛋白Bcl-2表達升高，而促凋亡蛋白Bax和Cleaved Caspase-9表達下降，均P＜0.05;
　　3.與正常對照組相比，膿毒癥組和胰島素組大鼠大腦皮質(zhì)

6、組織HE染色可見明顯異常病理改變，而與膿毒癥組相比，胰島素組大鼠大腦皮質(zhì)組織病理改變較膿毒癥組減輕;
　　4.與正常對照組相比，膿毒癥組大鼠皮質(zhì)組織UCP2mRNA和蛋白表達均升高;而與膿毒癥組相比，胰島素組大鼠皮質(zhì)組織UCP2mRNA和蛋白表達較均膿毒癥組升高。
　　結(jié)論：
　　1.U/kg長效胰島素皮下注射可有效改善膿毒癥大鼠生存
　　2.UCP2在膿毒癥大鼠腦組織中表達上調(diào);
　　3.胰島素可上調(diào)膿毒