GLP-1受體激動劑對小鼠脂肪細(xì)胞功能途徑的研究.pdf

1、第一部分 GLP-1受體激動劑通過NOS途徑促進(jìn)棕色脂肪細(xì)胞功能增加
　　目的：研究GLP-1受體在小鼠各組織器官中的表達(dá)情況，并明確GLP-1受體激動劑對小鼠脂肪細(xì)胞功能基因表達(dá)和分化的作用，探討其可能的相關(guān)機(jī)制。
　　方法:使用免疫組化及Western Blot檢測小鼠各組織器官中GLP-1R的表達(dá)情況。體外培養(yǎng)小鼠原代棕色、白色脂肪細(xì)胞，并鑒定。誘導(dǎo)分化前分別加入GLP-1、L-NAME(NOS抑制劑)干預(yù)5天。細(xì)胞培

2、養(yǎng)7天后對細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察研究，應(yīng)用熒光定量PCR、WesternBlot檢測解耦連蛋白1(UCP1)、細(xì)胞死亡介導(dǎo)DNA碎片因子樣受體α(Cidea)、過氧化物酶增殖物激活受體γ共激活因子1α(PGC1-α)、PR包含域16區(qū)(PRDM16)、過氧化物酶增殖物激活受體γ(PPAR-γ)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)、miRNA133a、miRNA196a、miRNA133b、miRNA155的表達(dá)，

3、采用單因素方差分析進(jìn)行多組間均數(shù)比較。
　　結(jié)果:免疫組化提示GLP-1R在小鼠胰腺、肝臟、腎臟、胃、心臟、骨骼肌、白色脂肪、棕色脂肪、肺臟、小腸中有表達(dá)，而在脾臟中表達(dá)為陰性。形態(tài)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)GLP-1組細(xì)胞內(nèi)脂滴數(shù)目較對照組明顯增加。與對照組相比，GLP-1組棕色脂肪特異性基因(UCP1、CideaPGC1-α)、分化基因(PRDM16、PPAR-γ)、NOS途徑基因(eNOS、iNOS)的mRNA水平升高(P＜0.05)，UC

4、P1、NOS蛋白水平升高(P＜0.05)。使用NOS抑制劑干預(yù)后，相關(guān)基因及蛋白水平下調(diào)。在棕色脂肪細(xì)胞中，與對照組相比，GLP-1組的微小RNA-155基因水平下降(P＜0.05)。
　　結(jié)論:GLP-1受體激動劑能上調(diào)棕色脂肪細(xì)胞功能基因的表達(dá)，促進(jìn)棕色脂肪前體細(xì)胞向成熟的棕色脂肪細(xì)胞分化，增強(qiáng)棕色脂肪組織的功能，該作用部分通過NOS途徑，且高濃度的GLP-1作用更明顯。
　　第二部分GLP-1受體激動劑通過STAT3途

5、徑促進(jìn)棕色脂肪細(xì)胞功能增加
　　目的:明確GLP-1受體激動劑對小鼠脂肪細(xì)胞功能基因表達(dá)和分化的作用，探討其可能的相關(guān)機(jī)制。
　　方法:體外培養(yǎng)小鼠原代棕色、白色脂肪細(xì)胞。誘導(dǎo)分化前分別加入GLP-1、S31-201（STAT3抑制劑）、exendin9-39(GLP-1受體拮抗劑)干預(yù)5天。細(xì)胞培養(yǎng)7天后對細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察研究，應(yīng)用熒光定量PCR、Western Blot檢測解耦連蛋白1(UCP1)、細(xì)胞死亡介導(dǎo)DNA碎

6、片因子樣受體α(Cidea)、過氧化物酶增殖物激活受體γ共激活因子1α（PGC1-α）、PR包含域16區(qū)(PRDM16)、過氧化物酶增殖物激活受體γ(PPAR-γ)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3(STAT3)的表達(dá)，采用單因素方差分析進(jìn)行多組間均數(shù)比較。
　　結(jié)果:形態(tài)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)GLP-1組細(xì)胞內(nèi)脂滴數(shù)目較對照組明顯增加。與對照組相比，GLP-1組棕色脂肪特異性基因（UCP1、Cidea、PGC1-Ⅱ）、分化基因(PRDM16、PPA