活血利濕補(bǔ)益肝腎法治療肝硬化的臨床及實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、肝硬化是一種以肝組織彌漫性纖維化、假小葉和再生結(jié)節(jié)形成為特征的慢性肝病。引起肝硬化的病因很多，在我國(guó)以病毒性肝炎所致的肝硬化為主，西醫(yī)認(rèn)為發(fā)病機(jī)制主要是在肝臟多種細(xì)胞及細(xì)胞因子（cytokine，CK）參與下，引起細(xì)胞外基質(zhì)（extracelluar matrix，ECM）的合成與降解失衡，即合成大于降解，導(dǎo)致ECM過(guò)度沉積所致?，F(xiàn)已證實(shí)，肝星形細(xì)胞（hepatic stellate cell，HSC）是肝臟產(chǎn)生ECM的主要細(xì)胞，HSC

2、活化是肝纖維化發(fā)生的中心環(huán)節(jié)。各種損肝因素導(dǎo)致肝損傷，繼而引起肝細(xì)胞壞死及炎癥刺激，相關(guān)細(xì)胞分泌多種CK激活HSC，產(chǎn)生大量的ECM。1995年，Sekelsky等在果蠅體內(nèi)首先發(fā)現(xiàn)了Smads蛋白，隨后的大量研究證實(shí)，Smads蛋白可將TGF-β信號(hào)直接由細(xì)胞膜激酶受體轉(zhuǎn)導(dǎo)入細(xì)胞核內(nèi)，是目前已知唯一的TGF-β受β體（TβR）胞內(nèi)激酶底物?，F(xiàn)已證實(shí)，TGFβ-Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程可直接刺激HSC表型轉(zhuǎn)化，誘導(dǎo)HSC凋亡，誘導(dǎo)基質(zhì)基因表

3、達(dá)，抑制基質(zhì)降解，并且間接影響肝細(xì)胞、庫(kù)普弗細(xì)胞、竇內(nèi)皮細(xì)胞多項(xiàng)正常功能的發(fā)揮，起到促進(jìn)肝纖維化發(fā)生發(fā)展的作用。慢性肝炎肝纖維化的發(fā)生率為59.36％，有25％～40％的肝纖維化患者發(fā)展成肝硬化，我國(guó)以乙型病毒性肝炎為多見(jiàn)。目前西醫(yī)尚無(wú)有效的抗肝硬化的藥物，中醫(yī)藥治療慢性肝病歷史悠久，作用明顯。 目的：本課題以中醫(yī)理論為指導(dǎo)，根據(jù)中醫(yī)文獻(xiàn)中有關(guān)“脅痛”“黃疸”“癥積”“臌脹”等的論述，認(rèn)為肝硬化病位主要在肝脾，久則及腎，古代醫(yī)家

4、提出“陽(yáng)虛易治，陰虛難調(diào)”，說(shuō)明肝腎陰虛既是肝硬化失代償期的一個(gè)重要病機(jī)，亦是常見(jiàn)而難治的證型。且該證型較其它證型更易引起肝昏迷和大出血等變證。結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)肝硬化的認(rèn)識(shí)和臨床實(shí)踐體會(huì)，病機(jī)主要是濕熱瘀毒互結(jié)，肝腎虧虛所致，確立活血利濕、補(bǔ)益肝腎的治療大法，治療采用的藥物蘭豆護(hù)肝顆粒是根據(jù)名老中醫(yī)鄒良材教授經(jīng)驗(yàn)方蘭豆楓楮湯研制而成，經(jīng)臨床多年應(yīng)用觀察，療效確切。本課題臨床研究部分方探討了該方治療肝硬化的療效機(jī)理。實(shí)驗(yàn)研究部分探討了蘭豆護(hù)

5、肝顆粒對(duì)大鼠肝纖維化的血清學(xué)、病理形態(tài)學(xué)影響，從而為防治肝纖維化的中藥新藥研究打下基礎(chǔ)，并為臨床早期診治肝纖維化提供了依據(jù)。 方法：按照隨機(jī)對(duì)照原則，本臨床研究觀察了180例肝炎肝硬化患者，對(duì)照組給予西醫(yī)常規(guī)治療，包括保肝降酶、利尿、退黃、補(bǔ)充白蛋白等基礎(chǔ)措施；治療組在西醫(yī)一般治療的基礎(chǔ)上，運(yùn)用蘭豆護(hù)肝顆粒，主要組成藥物有澤蘭10g、路路通10g、黑料豆15g、楮實(shí)子20g、茵陳15g、牛膝10g、陳葫蘆30g，每日3次，每次1

6、包沖服，療程均為6個(gè)月。觀察指標(biāo)包括臨床癥狀體征、肝功能、肝纖指標(biāo)等血清學(xué)檢查及影像形態(tài)學(xué)改變。 實(shí)驗(yàn)研究運(yùn)用現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)技術(shù)方法，使用純中藥制劑蘭豆護(hù)肝顆粒對(duì)實(shí)驗(yàn)性肝纖維化SD大鼠140只進(jìn)行干預(yù)，方劑由澤蘭10g、黑料豆10g、楮實(shí)子10g、路路通10g、川牛膝10g、茵陳10g、陳葫蘆20g組成，制劑濃度為2.64g/ml。實(shí)驗(yàn)分為兩個(gè)部分，分別為蘭豆護(hù)肝顆粒的預(yù)防用藥和治療用藥，選用秋水仙堿作為對(duì)照，應(yīng)用血清生化學(xué)檢查、常規(guī)

7、病理學(xué)及免疫病理學(xué)檢測(cè)等技術(shù)，觀察了蘭豆護(hù)肝顆粒預(yù)防、治療肝纖維化的療效，并探討其作用機(jī)制。 結(jié)果：臨床研究表明，蘭豆護(hù)肝顆粒能夠明顯降低患者血清轉(zhuǎn)氨酶活性，顯著降低γ球蛋白，改善白/球比值，治療前后兩組臨床癥狀體征、肝功能、肝纖指標(biāo)等血清學(xué)檢查及形態(tài)學(xué)均有不同程度改善，治療后兩組比較，療效差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。治療組基本治愈24例（27％），好轉(zhuǎn)49例（54％），無(wú)效17例（19％），總有效率81.1％。對(duì)照組基本治愈19例（21

8、％），好轉(zhuǎn)34例（38％），無(wú)效37例（41％），總有效率58.9％。治療組療效優(yōu)于對(duì)照組，兩組比較經(jīng)卡方檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。同時(shí)蘭豆護(hù)肝顆粒還可降低患者升高的HA、LN、Ⅳ型膠原，與治療前比有差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明：預(yù)防高劑量組、預(yù)防中劑量組、預(yù)防低劑量組、預(yù)防秋水仙堿組與模型Ⅰ組相比，ALT、AST差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），余指標(biāo)均有不同程度降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，

9、蘭豆護(hù)肝顆粒對(duì)大鼠急性肝損傷有一定的預(yù)防作用，并存在著一定的量效關(guān)系。對(duì)肝纖維化指標(biāo)的影響，預(yù)防高劑量組、預(yù)防中劑量組、預(yù)防秋水仙堿組與正常組相比，除LN外，余無(wú)顯著性差異，預(yù)防中劑量組、預(yù)防低劑量組纖維化指標(biāo)均有不同程度的升高；與模型組相比，預(yù)防高劑量組、預(yù)防中劑量組、預(yù)防秋水仙堿組均有不同程度降低，HA（P<0.01），PⅢNP（P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，LN無(wú)明顯差異；預(yù)防低劑量組HA（P<0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，預(yù)

10、防低劑量組LN、PⅢNP降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 在治療用藥實(shí)驗(yàn)部分，治療高劑量組、治療中劑量組、治療低劑量組、治療秋水仙堿組各組肝功能均有恢復(fù)，與模型Ⅱ組相比無(wú)顯著差異，CCl4所致實(shí)驗(yàn)性大鼠肝損傷模型，停止CCl4誘導(dǎo)后，肝功能可自我恢復(fù)，ALT、AST恢復(fù)較快，ALB、TP恢復(fù)較慢，大鼠肝臟修復(fù)功能比較強(qiáng)大，故各治療組與模型組之間并差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。肝纖維化指標(biāo)比較時(shí)，HA降低，與正常組比較無(wú)明顯差異，與模型Ⅰ組比較差異

11、顯著（P<0.01）、LN、PⅢNP較正常組顯著升高（P<0.05），與模型Ⅰ組比較無(wú)顯著性差異，提示CCl4誘導(dǎo)大鼠肝纖維化停止造模用藥后有自我恢復(fù)狀況，實(shí)驗(yàn)中模型Ⅱ組較模型Ⅰ組纖維化指標(biāo)雖有所好轉(zhuǎn)，但總體與正常組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；治療各組纖維化指標(biāo)都有不同程度的降低，與模型Ⅱ組相比，治療高劑量組、治療中劑量組、治療低劑量組、治療秋水仙堿組各組纖維化指標(biāo)均有改善，HA（P<0.01），治療高劑量組、治療中劑量組、治療秋水仙堿組各組LN

12、（P<0.05），治療高劑量組、治療秋水仙堿組PⅢNP（P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，蘭豆護(hù)肝顆粒對(duì)大鼠肝纖維化有較好的治療作用，并存在著量效關(guān)系。病理形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)蘭豆護(hù)肝顆粒對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化模型有較好的預(yù)防、治療作用，能抑制Smad4的表達(dá)，減少ECM的沉積。 結(jié)論：蘭豆護(hù)肝顆粒能緩解肝炎肝硬化患者的癥狀體征，保護(hù)肝功能，改善肝纖維化指標(biāo)，實(shí)驗(yàn)研究表明蘭豆護(hù)肝顆粒能顯著改善大鼠CCl4造模肝纖維化模型的肝功能