肝組織工程血管化基礎研究.pdf

1、目的：為了構建具有血管化的組織工程肝組織，本題進行了以下系列基礎性研究：1、肝組織工程血管化種子細胞的制備；2、肝血管支架材料相容性及支架血管化研究；3、血管生成的微環(huán)境(細胞外基質)研究；4、血管化肝組織塊的構建 方法：1.用膠原酶灌注Percoll純化法分離肝竇內皮細胞，肺組織塊貼壁法分離微血管內皮細胞，并進行細胞的鑒定。2.將微血管內皮細胞種植在PLGA和PEG的薄膜上，評價細胞與材料相容性。將含內管網的可降解PLGA多孔

2、支架的管道內皮化后植入小鼠腸系膜間，觀察植入2周、4周后體內血管化情況。3、先在加入VEGF165的纖維蛋白立體凝膠中誘導微血管內皮細胞形成血管樣結構，將形成了血管樣結構的纖維蛋白凝膠用多孔塑料薄膜包裹后植入到小鼠腸系膜間，于2周取出觀察凝膠血管化情況及其中的血管樣結構能否能變成有血流的微血管。4、用肝竇內皮細胞對內管網多孔可降解PLGA支架的管道進行內皮化，然后在網管外被覆一層稀薄的肝細胞和纖維蛋白凝膠混合物，構建肝組織塊，分別植入到

3、剝除肝包膜的肝表面和腸系膜間，觀察構建的肝組織塊存活和血管化情況。5、本研究中所有細胞移植均采用性別交叉移植的方法，用FISH法檢測SRY基因對外源細胞進行示蹤。 結果：1.肺組織塊貼壁法分離得到純度為87.25±1.55％，存活率達98％以上的微血管內皮細胞。用膠原酶灌注Percoll純化法能分離得到活力為95％的肝竇內皮細胞，95.8±3.39％的肝竇內皮細胞表達Ⅷ因子。2.PLGA材料與微血管內皮細胞的親和性優(yōu)于PEG，對

4、表面的流體沖擊力的耐受力強；內皮化明顯增強內管網支架血管化，體外內皮化支架中的內皮細胞參與了血管化，內皮化的支架管道能與宿主血流相通；支架血管化的進程為：血竇→無平滑肌的血管→血管。3、在加入VEGF165的纖維蛋白凝膠中立體培養(yǎng)微血管內皮細胞，誘導形成了血管樣結構；誘導形成的血管樣結構在植入體內后形成了微血管。4、體外構建的肝組織塊緊貼去包膜的肝面移植形成了血管化的肝組織，而移植至小鼠腸系膜間者則無肝細胞存活。 結論：1、采取