血管化組織工程骨修復(fù)牙槽嵴裂的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景:牙槽嵴裂是一種常見的先天性疾病，伴發(fā)于唇腭裂，嚴(yán)重影響患者的面容及功能。一般在唇裂和腭裂治療后一段時(shí)間(9-11歲)進(jìn)行修復(fù)，在這段時(shí)間內(nèi)前頜骨生長(zhǎng)發(fā)育的變化臨床上尚無定論。常規(guī)的治療方法是取自體松質(zhì)骨(髂骨或下頜骨)植入缺損部位，以恢復(fù)上頜牙槽骨連續(xù)性，同時(shí)使尖牙從植骨部位萌出，并矯正鼻翼基底部畸形。植骨后有相當(dāng)多的病例存在不同程度的植入骨吸收以及取骨區(qū)疼痛，跛行等并發(fā)癥。近十余年發(fā)展起來的組織工程骨技術(shù)在修復(fù)軀干與四肢的長(zhǎng)

2、骨部分缺損上取得了進(jìn)展，但工程骨的血管化目前仍然是一個(gè)懸而未決的問題，在牙槽嵴裂修復(fù)中的應(yīng)用也較少。 因此，有必要對(duì)唇裂和腭裂修復(fù)后前頜骨的生長(zhǎng)發(fā)育，組織工程骨及血管化的組織工程骨修復(fù)牙槽嵴裂后的形態(tài)改變等進(jìn)行研究，為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 第一部分雙側(cè)牙槽嵴裂動(dòng)物模型的建立及對(duì)上頜骨生長(zhǎng)發(fā)育的影響。 目的：建立雙側(cè)牙槽嵴裂大動(dòng)物模型，研究其對(duì)上頜骨發(fā)育的影響。 方法：選用8只12W齡的同窩實(shí)驗(yàn)犬，隨機(jī)

3、分成正常對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型組，對(duì)實(shí)驗(yàn)組的動(dòng)物采用外科手術(shù)的方法建立裂隙程度一致的雙側(cè)上頜牙槽嵴裂，術(shù)后12W處死動(dòng)物，通過實(shí)體標(biāo)本、三維CT對(duì)兩組動(dòng)物行頭顱測(cè)量。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M牙槽嵴裂裂隙為(10.81±0.41)mm，其上頜骨長(zhǎng)度、前部寬度和前部高度較正常對(duì)照組明顯縮小(P<0.05)。 結(jié)論：牙槽嵴裂對(duì)上頜骨生長(zhǎng)發(fā)育具有一定的影響。 第二部分組織工程骨修復(fù)牙槽嵴裂的實(shí)驗(yàn)研究。 目的：探討骨髓來源

4、的種子細(xì)胞復(fù)合膠原蛋白海綿構(gòu)建組織工程骨修復(fù)牙槽嵴裂的可行性。 方法：16條實(shí)驗(yàn)犬被分成4組。于雙側(cè)上頜第三切牙處去除15mm牙槽骨形成牙槽嵴裂動(dòng)物模型；經(jīng)股骨骨髓穿刺，分離骨髓基質(zhì)細(xì)胞，培養(yǎng)、傳代擴(kuò)增誘導(dǎo)后，與膠原蛋白海綿混合培養(yǎng)72h，植入骨缺損處。飼養(yǎng)12W后處死動(dòng)物，通過三維CT及組織學(xué)檢查評(píng)價(jià)骨缺損修復(fù)的效果。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組牙槽骨斷端間形成完整的骨連接，切片可見髓腔通暢，新形成的牙槽嵴寬度與松質(zhì)骨植入對(duì)照組相似

5、(P>0.05)，但高度不足(P<0.05)。 結(jié)論：組織工程骨修復(fù)牙槽嵴裂具有一定的可行性，有望成為修復(fù)牙槽嵴裂的治療方法。 第三部分血管化組織工程骨修復(fù)牙槽嵴裂的實(shí)驗(yàn)研究。 目的：探討應(yīng)用經(jīng)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)轉(zhuǎn)染的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)復(fù)合膠原蛋白海綿構(gòu)建的血管化組織工程骨修復(fù)牙槽嵴裂的可行性。 方法：經(jīng)股骨骨髓穿刺獲取犬BMSC經(jīng)分離、培養(yǎng)和鑒定后。轉(zhuǎn)染pAdMV-VEGF165質(zhì)

6、粒，流式細(xì)胞儀、RT-PCR和免疫組化檢測(cè)；轉(zhuǎn)染細(xì)胞與蛋白膠原海綿混合培養(yǎng)72h形成復(fù)合體；將復(fù)合體植于犬牙槽嵴裂模型的骨缺損處，12W后處死動(dòng)物，通過大體形態(tài)及X線、三維CT重建、組織學(xué)檢查等方法評(píng)價(jià)修復(fù)牙槽嵴裂的效果。 結(jié)果：轉(zhuǎn)染組骨缺損完全愈合，骨髓腔通暢，組織工程骨高度及寬度與自體松質(zhì)骨植入組無明顯差異(P>0.05)。 結(jié)論：由經(jīng)VEGF轉(zhuǎn)染的BMSC復(fù)合膠原蛋白海綿構(gòu)建的組織工程骨可以較好地修復(fù)牙槽嵴裂，在修

7、復(fù)后的形態(tài)、結(jié)構(gòu)等方面均與白體松質(zhì)骨修復(fù)相似，是一種牙槽嵴裂修復(fù)的良好方法。 第四部分內(nèi)皮前體細(xì)胞在組織工程骨修復(fù)牙槽嵴裂中的應(yīng)用。 目的：探討血管內(nèi)皮前體細(xì)胞(EPC)聯(lián)合骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)復(fù)合膠原蛋白海綿構(gòu)建的血管化組織工程骨修復(fù)牙槽嵴裂的可行性。 方法：20只實(shí)驗(yàn)犬被分成模型組、單純材料組、BMSC組、實(shí)驗(yàn)組、松質(zhì)骨植入組；經(jīng)股骨穿刺獲得犬骨髓分離BMSC、EPC，差異消化法純化EPC，經(jīng)培養(yǎng)和鑒定

8、后，與蛋白膠原海綿混合培養(yǎng)72h形成復(fù)合體；將復(fù)合體植于犬牙槽嵴裂模型的骨缺損處，12W后處死動(dòng)物，通過大體形態(tài)及x線、三維CT重建、組織學(xué)檢查等方法評(píng)價(jià)修復(fù)牙槽嵴裂的效果。 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組骨缺損完全愈合，骨髓腔通暢，骨密度、高度及寬度與自體松質(zhì)骨植入組無明顯差異(P>0.05)；單位面積血管數(shù)較對(duì)照組明顯增加(P<0.05)。 結(jié)論：EPC可以促進(jìn)組織工程骨血管化及骨化，與BMSC聯(lián)合形成組織工程骨可以較好地修復(fù)牙槽嵴裂