肝X受體改善脂肪組織胰島素抵抗機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　肝X受體是核受體超家族中的一員，對維持膽固醇穩(wěn)態(tài)，調(diào)節(jié)糖脂代謝都有重要作用。在本次研究中，我們觀察了小鼠脂肪組織和3T3-L1脂肪細(xì)胞中LXR激動(dòng)劑TO901317在基礎(chǔ)狀態(tài)及胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下對糖代謝的影響，并進(jìn)一步探討了其改善胰島素抵抗的分子機(jī)制。
　　方法：
　?。?）選用雄性db/db和C57BL/6小鼠為研究對象，隨機(jī)分為db/db對照組（db/db Con）和db/db TO901317組（db/

2、db TO）；C57 Con組和C57 TO組，每組入組9只。db/db Con和C57 Con組每日腹腔注射DMSO(10％DMSO250ul)，db/db TO和C57 TO組每日腹腔注射LXR激動(dòng)劑TO901317（30mg/kg），共用藥14天。測定小鼠體重，空腹血糖（FBG）、空腹胰島素（Fins）和游離脂肪酸（FFA）及行腹腔胰島素耐量試驗(yàn)（ITT）。
　?。?）小鼠處死后取附睪脂肪組織，實(shí)時(shí)定量-聚合酶鏈反應(yīng)（Rea

3、l-time PCR）的方法測定各組小鼠脂肪組織內(nèi)己糖激酶（HK）、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體-4（GLUT4）mRNA的變化；應(yīng)用免疫印跡法觀察小鼠脂肪組織內(nèi)蛋白激酶B（Akt）磷酸化水平的改變。選取3T3-L1脂肪細(xì)胞，用棕櫚酸（Palmitate，PA）誘導(dǎo)成胰島素抵抗的細(xì)胞模型，再觀察TO901317對葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)的作用。應(yīng)用Real-time PCR的方法測定成模后單獨(dú)及與TO901317聯(lián)合應(yīng)用3T3-L1脂肪細(xì)胞內(nèi)HK、GLUT4 mRN

4、A的表達(dá)變化及應(yīng)用免疫印跡法觀察TO901317對存在胰島素抵抗的3T3-L1細(xì)胞內(nèi)Akt蛋白磷酸化水平的改變。
　?。?）應(yīng)用免疫印跡法觀察TO901317活化LXR后，db/db、C57小鼠脂肪組織和胰島素抵抗的3T3-L1細(xì)胞模型中，c-jun氨基末端激酶（JNK）蛋白磷酸化水平的改變。
　　結(jié)果：
　　（1）與C57小鼠比較，db/db小鼠的體重、胰島素耐量試驗(yàn)葡萄糖曲線下面積（AUC）、FFA、穩(wěn)態(tài)模型胰島素

5、分泌指數(shù)（HOMA-IS）顯著較高，P＜0.05；胰島素敏感指數(shù)（ISI）顯著較低，P＜0.05。與db/db Con小組相比，db/db TO組的AUC降低，HOMA-IS及ISI升高，P＜0.05；體重、血清FFA沒有明顯變化。與C57 Con組相比，C57 TO組AUC、HOMA-IS、ISI、體重、FFA均無明顯改變。
　　（2）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中Real-time PCR結(jié)果示db/db小鼠用藥后HK、GLUT4 mRNA表達(dá)量

6、上調(diào)，P＜0.05。C57用藥前后無明顯變化。Western blot結(jié)果顯示，與db/db Con組相比，db/db TO組小鼠的脂肪組織在Akt總蛋白不變的情況下，Akt蛋白的磷酸化水平升高。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)用PA誘導(dǎo)3T3-L1脂肪細(xì)胞后，出現(xiàn)Akt蛋白磷酸化水平降低，胰島素抵抗模型建成。TO901317與PA共同應(yīng)用比單獨(dú)應(yīng)用PA葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)量增高，P＜0.05。TO901317與PA共同孵育3T3-L1脂肪細(xì)胞逆轉(zhuǎn)了PA單獨(dú)應(yīng)用

7、時(shí)所致的HK、GLUT4 mRNA的表達(dá)下調(diào)，P＜0.05。而TO901317單獨(dú)應(yīng)用于正常3T3-L1脂肪細(xì)胞時(shí)僅上調(diào)了GLUT4 mRNA的表達(dá)量，P＜0.05，HK mRNA表達(dá)量無影響。Western blot結(jié)果顯示，與PA單獨(dú)孵育3T3-L1脂肪細(xì)胞相比，PA與TO901317共同孵育后3T3-L1脂肪細(xì)胞內(nèi)，Akt蛋白磷酸化水平升高而Akt總蛋白保持不變。
　?。?）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)Western blot結(jié)果顯示，與db/

8、db Con組相比，db/db TO組小鼠的脂肪組織在JNK總蛋白不變的情況下，JNK蛋白磷酸化水平降低。與C57 Con組相比，C57 TO組小鼠脂肪組織JNK蛋白磷酸化及總蛋白水平均未出現(xiàn)改變。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)示：TO901317作用于3T3-L1胰島素抵抗細(xì)胞模型后JNK蛋白磷酸化水平明顯降低而總蛋白保持不變。
　　結(jié)論：
　?。?）在胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下LXR活化后有顯著的降糖和增加胰島素敏感性的效應(yīng)。在無胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下，LX