腺病毒介導(dǎo)的PAI-2基因?qū)θ橄侔┘?xì)胞遷移影響的研究.pdf

1、乳腺癌是威脅人類健康乃至生命的重要疾病。在中國,乳腺癌發(fā)病的年增長率比世界平均水平高出1％-2％,而我國對于乳腺癌的發(fā)病機(jī)制及治療技術(shù)的研究仍然相對落后。腫瘤基因治療一直是腫瘤的生物治療方法,一般使用的病毒載體是腺病毒,通過對其改造成為增殖型腺病毒,并攜帶抗癌基因靶向在腫瘤細(xì)胞增殖及復(fù)制,表達(dá)抗癌相關(guān)基因并抑殺腫瘤,起到抗癌和溶瘤的雙重效果,而對正常細(xì)胞影響較小。
　　 人纖溶酶原激活劑抑制劑2(PAI-2)是絲氨酸蛋白酶抑制物

2、超家族成員,其在細(xì)胞的凋亡和分化、腫瘤的轉(zhuǎn)移中都有重要的作用。因此本研究構(gòu)建攜帶雙基因人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動子(hTERTp)調(diào)控的腺病毒E1A基因和人纖溶酶原激活劑抑制劑2(PAI-2)基因的增殖型腺病毒載體。pAdSu-PAI-2,研究該增殖型腺病毒對乳腺癌細(xì)胞增殖和遷移的影響。首先采用同源重組的原理將載體pAdSu-PAI-2與腺病毒骨架質(zhì)粒相作用,獲得重組型腺病毒AdSu-PAI-2,Western結(jié)果顯示該增殖型腺病毒能夠在乳腺

3、癌細(xì)胞MDA-MB-231中表達(dá),同時溶圈抑制實(shí)驗(yàn)證明重組PAI-2蛋白具有抑制尿激酶的生物活性。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell遷移實(shí)驗(yàn)均證明該P(yáng)AI-2基因具有抑制乳腺癌細(xì)胞遷移的作用。通過對MAPK信號通路的研究,發(fā)現(xiàn)該基因能夠下調(diào)p38的磷酸化,而對ERK的磷酸化則沒有影響。綜上說明腺病毒介導(dǎo)表達(dá)的重組PAI-2蛋白具有抑制尿激酶的生物學(xué)活性,且能抑制乳腺癌細(xì)胞的遷移,并且能夠通過抑制p38 MAPK信號通路的活性影響細(xì)胞的運(yùn)動

4、能力。
　　 尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)系統(tǒng)主要參與細(xì)胞外蛋白的溶解和組織修復(fù),在腫瘤轉(zhuǎn)移中也扮演著重要角色。因此本論文還研究了血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)對乳腺癌細(xì)胞遷移及對uPA系統(tǒng)成員表達(dá)的影響,并擴(kuò)增腺病毒Ad-NRAGE及Ad—RNAi,檢測NRAGE基因?qū)PA系統(tǒng)成員表達(dá)的影響。Q-PCR結(jié)果顯示在MDA-MB-231細(xì)胞中AngⅡ能夠促進(jìn)uPA和uPAR的表達(dá),細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)證明AngⅡ能促進(jìn)細(xì)胞遷移。通過在細(xì)胞