表皮生長(zhǎng)因子受體反義重組腺病毒對(duì)乳腺癌細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院碩士學(xué)位論文表皮生長(zhǎng)因子受體反義重組腺病毒對(duì)乳腺癌細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究姓名：李運(yùn)軍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：馬林20050519軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院煩士學(xué)位論文表皮生長(zhǎng)因子受體反義重組腺病毒對(duì)乳腺癌細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究中文摘要目的：表皮生長(zhǎng)因子受體( E G F R ) 是原癌基因H E R l ( c —e r b B l ) 的表達(dá)產(chǎn)物，在許多腫瘤細(xì)胞中超量表達(dá)、基因擴(kuò)增和／或突變，并借助其介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)

2、使細(xì)胞生長(zhǎng)失控和惡性轉(zhuǎn)化。在乳腺癌實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蜕?，我們發(fā)現(xiàn)E G F R的表達(dá)隨著腫瘤發(fā)生能力的增強(qiáng)而提高，而且E G F R 反義R N A 表達(dá)載體可逆轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化表型。為了尋求治療乳腺癌的新手段，我們開(kāi)發(fā)了E G F R 反義重組腺病毒，并通過(guò)觀察其對(duì)人乳腺癌M o A —M B 一2 3 l 細(xì)胞的體外增殖作用情況，以及對(duì)其放療敏感性的影- 向，初步探討其作為治療乳腺癌新手段的機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法：人乳腺癌細(xì)胞系M D A - M B 一2 3

3、 1 常規(guī)培養(yǎng)，細(xì)胞計(jì)數(shù)繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線；人E G F R 的c D N A 片段被反向亞克隆入E l ／E 3 缺失的5 型腺病毒載體中而得到A d E 5 ，E G F R 反義R N A 的表這由C M V 啟動(dòng)子控制；進(jìn)而用細(xì)胞培養(yǎng)和流式細(xì)胞儀( F C M ) 技術(shù)研究其對(duì)人乳腺癌細(xì)胞株M D A - M B 一2 3 l 凋亡及細(xì)胞周期分布的影響，比較聯(lián)合v 一射線對(duì)M D A - b I B - 2 3 1 克隆形成率及細(xì)

4、胞周期分布的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：( 1 ) M D A - M B 一2 3 1 細(xì)胞被A d E 5 感染后，E G F R 蛋白質(zhì)的表達(dá)被強(qiáng)烈地抑制，但并不導(dǎo)致細(xì)胞凋亡；( 2 ) A d E 5 感染后以Y 一射線照射細(xì)胞，克隆形成率被抑制。且這種作用與病毒量和照射劑量相關(guān)聯(lián)；( 3 ) 進(jìn)而流式細(xì)胞儀分析顯示，3 0 0 p f u ／細(xì)胞的A d E 5 轉(zhuǎn)染可使M D A - M B - 2 3 1 細(xì)胞擺脫對(duì)放射線抗拒的G